Apelin-13诱导JNK信号途径调控Bcl-2对肝癌HepG2细胞自噬的影响

发布时间：2017-11-10 09:23

  本文关键词：Apelin-13诱导JNK信号途径调控Bcl-2对肝癌HepG2细胞自噬的影响

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【摘要】：目的:研究Apelin-13处理肝癌Hep G2细胞后对JNK及Bcl-2磷酸化的影响,探讨Apelin-13激活肝癌Hep G2细胞中的自噬调控机制。方法:1.Hep G2细胞培养及分组:RPMI l640培养基加入10%胎牛血清,用于培养人肝癌细胞株Hep G2,置于恒温37℃、5%CO2、充分湿度饱和的细胞培养箱内进行培养。实验细胞分为Apelin-13组,分别为:对照组(10%FBS)、0.0001μmol/L组、0.001μmol/L组、0.01μmol/L组、0.1μmol/L组。SP600125组分别为:对照组(10%FBS)、Apelin-13(0.1μmol/L)组、Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)、SP600125(20μmol/L)组、DMSO(溶媒)组;2.Western blot法:检测Apelin-13、JNK抑制剂SP600125分别处理肝癌Hep G2细胞后,JNK、Bcl-2磷酸化蛋白水平的改变及Beclin1的蛋白表达;3.q RT-PCR法:检测各实验组Beclin1 m RNA的表达水平;4.MDC荧光染色法:MDC染色后荧光倒置显微镜下观察各组细胞中自噬小体的生成情况。结果:1.Western blot法:分别用浓度为0μmol/L、0.0001μmol/L、0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L的Apelin-13处理肝癌Hep G2细胞24h后,各组中p JNK蛋白的相对表达量如下:0.333±0.007,0.425±0.015,0.529±0.019,0.883±0.036,1.554±0.021,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P0.01);p Bcl-2蛋白的相对表达量分别是:0.241±0.038,0.475±0.027,1.224±0.032,1.753±0.052,3.072±0.016,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P0.01);Beclin1蛋白的相对表达量分别是:0.281±0.007、0.485±0.015、1.540±0.015、2.061±0.010、2.931±0.012,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。加入JNK抑制剂SP600125处理肝癌Hep G2细胞后,各组p JNK蛋白的相对表达量分别是:0.446±0.020、1.018±0.012、0.132±0.006、0.138±0.079、0.462±0.018;Apelin-13(0.1μmol/L)组与其余各组比较差异均有统计学意义(P0.01),Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)组与SP600125(20μmol/L)组比较差异无明显统计学意义(P0.05),而与其他组别比较差异有统计学意义(P0.01);p Bcl-2蛋白的相对表达量分别是:0.029±0.002、1.878±0.036、0.217±0.010、0.196±0.015、0.031±0.024,Apelin-13(0.1μmol/L)组与其他各组比较差异均有统计学意义(P0.01)、Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)组与SP600125(20μmol/L)组比较无明显统计学意义(P0.05),而与其他组别比较差异有统计学意义(P0.01);Beclin1蛋白的相对表达量分别是:0.145±0.012、1.387±0.017、0.449±0.038、0.119±0.018、0.158±0.007;Apelin-13(0.1μmol/L)组、Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)组及SP600125(20μmol/L)组与其他组别比较差异均有统计学意义(P0.05);2.q RT-PCR法:Apelin-13处理肝癌Hep G2细胞后Beclin1 m RNA的相对表达量分别是:1.011±0.010、1.735±0.115、2.269±0.007、3.137±0.113、4.157±0.235;实验组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);加入JNK抑制剂SP600125处理肝癌Hep G2细胞后,Beclin1 m RNA的相对表达量分别是:1.054±0.074、7.865±0.219、1.563±0.102、0.813±0.012、1.012±0.093;Apelin-13(0.1μmol/L)组、Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)组和SP600125(20μmol/L)组与其他组别比较差异有统计学意义(P0.05);3.MDC荧光染色法:随着Apelin-13浓度的升高,在荧光倒置显微镜中肝癌Hep G2细胞中被MDC染色的呈现蓝绿色荧光颗粒的小体增多。而随着JNK的抑制剂SP600125加入后,肝癌Hep G2细胞中的蓝绿色荧光小体较Apelin-13(0.1μmol/L)组明显减少。结论:Apelin-13能通过JNK信号通路调节Bcl-2的磷酸化介导肝癌Hep G2细胞中的自噬。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

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本文编号：1166034