细胞凋亡影响CIK细胞抗肿瘤功能的作用及其调控机制

发布时间：2017-11-14 08:27

  本文关键词：细胞凋亡影响CIK细胞抗肿瘤功能的作用及其调控机制

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【摘要】：目的:探讨CIK细胞凋亡对其抗肿瘤功能的影响,并初步探讨CIK细胞凋亡的机制。方法:倒置显微镜观察健康人外周血来源的CIK细胞(PB-CIK)、脐带血来源的CIK细胞(CB-CIK)、癌症患者外周血来源的CIK细胞(PBP-CIK)在诱导过程中的形态变化,检测3种CIK细胞生长情况,流式细胞术检测3种CIK细胞CD3、CD56分子表达。流式细胞术检测死亡受体Fas表达和CB-CIK杀伤肿瘤过程中及诱导过程中细胞凋亡。采用Calcein-AM法检测CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。RT-PCR、Western blot检测CB-CIK诱导过程中c-FLIP L、c-FLIPR、c-FLIPS m RNA和蛋白表达。结果:3种不同来源的CIK细胞均在诱导7d后进入指数生长期,但诱导14d时,PB-CIK、CB-CIK细胞数量可扩增100倍,PBP-CIK细胞数量可扩增40倍;PBP-CIK中CD3+CD56+细胞数量明显少于CB-CIK、PB-CIK中CD3+CD56+细胞数量,差异具有统计学意义(P0.05)。诱导14d,三种来源的CIK细胞Fas表达均超过90%,差异无统计学意义;PBP-CIK细胞在诱导14d时的凋亡水平与PB-CIK、CB-CIK细胞凋亡水平相比,明显升高,差异具有统计学意义(P0.01);效靶≥10:1时CIK凋亡水平下降,杀伤水平上升;Caspase3,Caspase8,Caspase9抑制剂分别作用后,CIK凋亡水平下降,CIK细胞杀伤肿瘤水平上升,差异均具有统计学意义(P0.05);在诱导3d,CIK细胞凋亡水平最高,之后凋亡水平下降,c-FLIPR和c-FLIPS在诱导3d时表达水平最低,之后逐渐升高。结论:CB-CIK、PB-CIK细胞增殖能力明显强于PBP-CIK细胞。CIK细胞诱导和杀伤肿瘤时均会发生凋亡并影响其抗肿瘤功能。c-FLIPS、c-FLIPR蛋白可能与CIK细胞凋亡与其抗肿瘤功能有关。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2

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本文编号：1184641