靶向CD138嵌合抗原受体的表达优化及其对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞杀伤影响

发布时间：2017-11-14 17:24

  本文关键词：靶向CD138嵌合抗原受体的表达优化及其对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞杀伤影响

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【摘要】：研究背景：多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma, MM)是第二常见的血液系统恶性肿瘤,克隆性浆细胞在骨髓及髓外病灶积聚,并最终引起肾衰竭,免疫抑制伴反复感染,贫血以及骨质损伤。尽管MM的治疗有了长足的进步,但至今仍是不可治愈的恶性疾病,绝大多数的患者最终会复发或进展。嵌合抗原受体修饰的T细胞(Chimeric antigen receptors modified T cells, CAR-T)已成为当下肿瘤免疫治疗和靶向治疗的研究热点,尤其是靶向CD19 CAR-T细胞治疗在CD19阳性B细胞恶性肿瘤中取得的显著疗效。CARs技术在MM治疗领域的应用研究可能为MM患者的预后带来新的希望。目的：本研究选择了CD1 38作为靶点设计对应的CAR结构,通过更换具有更高表达活性的启动子优化载有CAR基因片段的基因载体,增加CARs的表达水平,比较优化前后的CAR-T细胞对CD138阳性MM细胞系RPMI8226的杀伤活性。方法：(1)构建载有CAR基因及不同启动子的基因载体；(2)验证启动子对下游CAR基因的表达活性；(3)制备优化前后两组靶向CD138CAR-T细胞、流式细胞术检测；(4)将靶向CD138 CAR-T细胞与RPMI8226细胞共培养、检测杀伤活性。结果：(1)成功构建了本试验所需要的基因载体；(2)优化后基因载体具有更高表达活性；(3)成功制备了优化前后两组靶向CD138 CAR-T细胞,阳性率分别为13.32%与10.16%；(4)在不同效靶比的情况下,CAR-T组的杀伤活性均高于CIK组,且P0.05,具有显著差异；不同效靶比下,PWPXL-CAR-T组的杀伤活性均高于PWPT-CAR-T组,T检验P0.05,差异不显著.结论：(1)启动子EF-1α比EF-1α-short具有更高的表达活性,可以用于增加CAR-T细胞表面CARs的表达水平,说明在启动子水平优化CAR基因载体以提高细胞表面CARs表达水平是可行的；(2)本研究成功制备了优化前后两组靶向CD138 CAR-T细胞：(3)靶向CD138 CAR-T细胞与未经基因修饰的CIK细胞相比对CD138阳性的RPMI8226细胞具有增强的杀伤活性；(4)增加靶向CD138CAR-T细胞表面CARs的表达水平可能会增加它对CD1 38阳性RPMI8226细胞的杀伤活性。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.3
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本文编号：1186342