GP73在肝癌细胞侵袭和迁移过程中的作用
发布时间：2017-11-16 22:18
本文关键词：GP73在肝癌细胞侵袭和迁移过程中的作用
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【摘要】：目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默人肝癌细胞中高尔基体蛋白73(GP73)基因表达后,对其侵袭和迁移能力的影响,并探索其相关机制,为将该基因应用于肝癌的基因靶向治疗提供理论依据。方法:1.根据GP73序列和siRNA的设计原则,设计合成一条靶向GP73基因的小干扰RNA(siRNA),应用阳离子脂质体法将设计合成的GP73 siRNA瞬时转染HepG2和SMMC7721细胞。采用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法检测转染后2株细胞GP73 mRNA和蛋白表达水平变化;2.按最佳转染条件沉默GP73基因的表达后,采用Transwell侵袭实验观察HepG2和SMMC7721细胞侵袭能力改变,采用Transwell迁移实验以及划痕愈合实验分别观察其纵向和横向迁移能力改变;3.qRT-PCR和Western blot法检测侵袭相关因子及通路蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、锌指转录因子(Snail)、波形蛋白(Vimentin)的表达情况,探索沉默GP73基因后影响细胞侵袭和迁移能力的潜在机制。结果:1.GP73 si RNA能显著降低HepG2和SMMC7721细胞中GP73 mRNA和蛋白的表达;2.GP73 siRNA沉默GP73基因的表达后,HepG2和SMMC7721细胞的侵袭和迁移能力均较对照组明显降低;3.有效沉默GP73后,qRT-PCR结果显示MMP-2、MMP-9、Snail和Vimentin的mRNA表达水平有所降低,而E-cadherin mRNA表达水平有所升高;相应地,Western blot结果也显示MMP-2、MMP-9、Snail和Vimentin的蛋白表达水平有所降低,但E-cadherin的蛋白表达水平有所升高。结论:1.GP73 siRNA可明显降低GP73基因在HepG2和SMMC7721细胞中的表达水平;2.GP73 siRNA有效沉默GP73基因表达后,HepG2和SMMC7721细胞的侵袭和迁移能力均受到明显抑制;3.GP73 siRNA干扰介导GP73基因沉默后,可能是通过下调MMP-2和MMP-9的表达水平来抑制肝癌细胞侵袭和迁移能力,还可能通过Snail/E-cadherin/Vimentin信号通路来抑制其侵袭和迁移;4.GP73可以成为肝癌基因治疗的靶标基因。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
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本文编号：1193875
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