Toll样受体2对人肝细胞癌生物学行为的作用

发布时间：2017-11-19 12:19

  本文关键词：Toll样受体2对人肝细胞癌生物学行为的作用

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【摘要】：研究背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国最常见的消化系统恶性肿瘤之一,具有较高的发病率及死亡率。到目前为止,肝细胞癌的发病机制并不完全明确,且缺乏有效的治疗方法,所以研究肝细胞癌的发病机制,寻找新的、有效的治疗靶点、治疗方法仍是迫切需要解决的问题。Toll样受体2(toll-like receptor2,TLR2)是介导非特异性免疫反应的重要固有免疫受体,其信号途径亦被认为是慢性炎症发生的一种机制,但是其也可以介导肿瘤细胞免疫逃避以及肿瘤发展。然而,TLR2在人肝细胞癌的发展的作用尚需进一步研究。目的研究TLR2对人肝细胞癌细胞系HepG2、BEL-7402细胞生物学行为的作用及其作用机制。方法1培养两种人肝癌细胞系：HepG2、BEL-7402,用Western blot方法检测两种细胞系TLR2蛋白表达水平；2 siRNA转染：合成3条针对TLR2的特异性小干扰RNA(TLR2-siRNA1、 TLR2-siRNA2、TLR2-siRNA3)。用TLR2-siRNAs转染HepG2、BEL-7402细胞。用Real time PCR、Western blot方法分别在mRNA和蛋白水平检测TLR2-siRNA的干扰效率,并筛选干扰效率最高的一条小干扰RNA用于后续实验处理,实验分组：空白组、阴性对照组、TLR2-siRNA组；3重组高迁移率族蛋白1(recombinant high mobility group box1, rHMGB1)处理：用rHMGB1处理转染后的细胞。实验分组：空白组、rHMGB1处理组、阴性对照+rHMGB1处理组、TLR2-siRNA+rHMGB1处理组：4细胞生物学行为检测：MTT法检测HepG2、BEL-7402人肝癌细胞的增殖能力；Transwell实验检测两种肝癌细胞的迁移、侵袭能力；流式细胞术检测细胞的凋亡；5 Western blot检测NF-KB/P65的表达。结果1 Western blot结果显示：TLR2在HepG2、BEL-7402两种人肝癌细胞系中均表达；2 TLR2-siRNA明显的抑制TLR2的表达；Western blot和Real Time PCR检测显示：TLR2-siRNAs组的蛋白及mRNA表达水平均较空白组及阴性对照组明显下降(P0.001),而以TLR2-siRNA2的干扰效率最高。3 rHMGB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制凋亡；而TLR2-siRNA抑制细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,并可减弱rHMGB1的作用；MTT结果示：TLR2-siRNA组的细胞增殖能力较阴性对照组、空白组明显下降(P0.001),而rHMGB1组细胞生长能力较rHMGB1+TLR2-siRNA组、空白组明显增高(P0.001); Transwell实验显示：TLR2-siRNA组的细胞迁移、侵袭能力较阴性对照组、空白组明显下降(P0.01),而rHMGB1组细胞迁移、侵袭能力较rHMGB1+TLR2-siRN A组、空白组明显增高(P0.001)；流式细胞术结果示：TLR2-siRNA组的细胞凋亡较阴性对照组、空白组明显升高(P0.001),而rHMGB1组细胞凋亡能力较rHMGB1+TLR2-siRNA组、空白组明显下降。4 rHMGB1提高NF-κB/P65的表达；而TLR2-siRNA降低NF-κB/P65表达,并减弱rHMGB1对NF-κB/P65表达的促进作用；Western blot检测示：TLR2-siRNA组的细胞NF-κB/P65的表达水平较阴性对照组、空白组明显下降(P0.001),而rHMGB1组细胞NF-κB/P65的表达水平较rHMGB1+TLR2-siRNA组、空白组明显增高(P0.01)。结论1 TLR2、高迁移率族蛋白1 (high mobility group boxl, HMGB1)可以促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭而抑制其凋亡。下调TLR2的表达能明显减弱HMGB1的作用,TLR2可能是HMGB1发生促癌作用的下游信号分子之一。2研究提示：NF-κB/P65为HMGB1、TLR2促进肝癌发展的下游作用信号分子。3 TLR2有望成为肝细胞癌的新的治疗靶点。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

【参考文献】

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1 王文举;李鸿钧;孙茂盛;;NF-κB与持久炎症及肿瘤发生关系[J];生命的化学;2007年03期

2 刘印;田京;;肝细胞癌相关信号通路及靶向治疗研究进展[J];实用医学杂志;2013年06期

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本文编号：1203527