人结肠癌细胞株HT-29表达Tn抗原的机制研究

发布时间：2017-11-22 22:06

  本文关键词：人结肠癌细胞株HT-29表达Tn抗原的机制研究

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【摘要】：目的：免疫磁珠分选人结肠癌细胞株HT-29中Tn抗原阳性(HT-29-Tn~+)细胞,探讨其表达Tn抗原的机制,为结肠癌的诊断及治疗提供新的靶点及实验理论依据。方法：培养结肠癌细胞株HT-29,胃癌细胞株BGC823和白血病细胞株.urkat T;密度梯度离心法分离正常女性外周血单个核细胞(PBMC);免疫磁珠分选HT-29-Tn~+与HT-29-Tn细胞；流式细胞术检测Tn抗原表达状况；PCR、PT-PCR扩增Cosmc基因,测序对比是否存在Cosmc基因突变及SNP位点；BSP法检测Cosmc启动子CpG岛基因的甲基化频率；WtCosmc质粒转染正常及肿瘤细胞；Western Blot检测转染后Cosmc蛋白的表达状况；荧光分析法检测转染前后T-synthase活性的变化。结果：HT-29-Tn~+细胞中Cosmc编码区基因缺失,T-synthase失活；正常女性细胞中Cosmc非编码区存在SNP位点,CpG岛甲基化频率约50%,而在HT-29-Tn~+与HT-29-Tn-细胞中均未检测到Cosmc非编码区SNP位点及启动子CpG岛的甲基化；Tn抗原阳性细胞(HT-29-Tn~+和Jurkat T细胞)转染WtCosmc后,Tn抗原的表达量明显下降,T-synthase活性显著增高。结论：来源于女性结肠癌患者的HT-29细胞中Cosmc仅存在一条有活性的等位基因,而该等位基因编码区的缺失是导致HT-29-Tn~+细胞T-synthase失活,Tn抗原表达的原因；WtCosmc质粒转染Tn抗原阳性细胞可恢复T-synthase的活性,抑制其Tn抗原的表达。
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35

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本文编号：1216191