miR-125b靶向SEMA4C调控乳腺癌紫杉醇耐药细胞EMT研究

发布时间：2017-11-23 17:13

  本文关键词：miR-125b靶向SEMA4C调控乳腺癌紫杉醇耐药细胞EMT研究

  更多相关文章： miRNA-125b SEMA4C 乳腺癌 紫杉醇 EMT

【摘要】：背景:乳腺癌是引起女性死亡的主要原因之一。紫杉醇(Paclitaxel)是临床转移性和侵袭性乳腺癌一线化疗药物,但其耐受性限制其临床应用。研究发现,化疗耐药性的产生与细胞EMT(epithelial-mesenchymal transition,上皮-间质转变)过程具有一定的相关性,针对EMT诱导机制的研究利于乳腺癌临床辅助化疗方案的制定。micro RNAs(mi RNA)是乳腺的发育和乳腺癌发生发展等生理病理过程中控制基因表达的主要调控因子,越来越多的证据显示在乳腺癌化疗介导的EMT过程中扮演着重要角色,可通过抑制EMT诱导物控制细胞的可塑性,或通过抑制介导细胞上皮以及间质形态的靶基因来影响细胞的形态。目的:研究mi R-125b对人乳腺癌MCF-7、SKBR-3紫杉醇耐药细胞株(下面简称“MCF-7/PR”和“SKBR3/PR”)EMT过程的调控作用及机制。方法:⑴qRT-PCR检测mi R-125b在24对乳腺癌标本及其对应的癌旁标本的表达以及在乳腺癌亲本细胞株MCF-7,SKBR-3和对应的人乳腺癌MCF-7、SKBR3紫杉醇耐药细胞株MCF-7/PR”和“SKBR-3/PR的表达情况;⑵利用化学合成的mi R-125b类似物转染MCF-7/PR、SKBR-3/PR细胞,通过伤口愈合实验(Wound-healing assay)、细胞侵袭实验(Transwell assay)、细胞黏附与分离实验(Attachment and detachment assay)检测转染后细胞的生物学活性的改变,倒置显微镜观察转染后MCF-7/PR、SKBR-3/PR细胞的形态学改变;⑶利用q RT-PCR和Western blotting技术检测mi R-125b类似物转染MCF-7/PR、SKBR-3/PR细胞后EMT相关指标E-cadherin、Snail、Slug、Vimentin在分子水平和蛋白水平上的改变;⑷利用生物信息学技术预测mi R-125b的靶基因,并通过荧光素酶实验、q RT-PCR和Western blotting技术验证;⑸免疫组化实验检测SEMAC在乳腺癌组织中的表达情况;⑹采用Fisher确切概率法分析乳腺癌中mi R-125b及其靶基因SEMA4C的表达与患者病理特征间的相关性;⑺利用RNA干扰技术下调SEMA4C的表达,通过划痕实验、趋化实验、粘附分离实验,分析SEMA4C对MCF-7/PR、SKBR-3/PR细胞生物学活性影响;⑻利用q RT-PCR和Western blotting技术检测SEMA4C干扰后EMT相关标志物的表达改变;⑼SRB实验检测转染mi R-125b类似物和SEMA4C干扰后MCF-7/PR、SKBR-3/PR细胞对紫杉醇的药物敏感性变化。结果:⑴mi R-125b在乳腺癌组织中的表达明显低于对应的癌旁组织,相应的在人乳腺癌紫杉醇耐药细胞株的表达低于其对应的亲本细胞株;⑵转染mi R-125b类似物后耐药细胞株的黏附分离能力、迁移能力和趋化能力明显低于对照组(P0.05),镜下观察发现转染后的耐药细胞由瘦长的成纤维样细胞形态逐渐转变为浑圆的上皮样细胞形态;⑶转染mi R-125b类似物后耐药细胞株上皮细胞相关标志E-cadherin明显升高(P0.05);间质细胞相关标志如Slug、Snail、Vimentin(P0.05)明显下降;⑷生物信息学分析表明SEMA4C是mi R-125b的潜在靶基因之一,荧光素酶实验、q RT-PCR和Western blotting技术进一步证实;⑸免疫组化实验证实SEMA4C在乳腺癌组织中高表达,mi R-125b的表达与SEMA4C负相关,临床病理资料分析发现两者与cerb B-2表达及乳腺癌淋巴转移成负相关;⑹SEMA4C si RNA能够有效地下调耐药细胞株中SEMA4C的表达,并抑制耐药细胞的迁移侵袭和黏附分离能力(P0.05);⑺SEMA4C干扰后E-cadherin的表达上调(P0.05),Slug、Snail和Vimentin的表达下调(P0.05),(P0.01);⑻转染mi R-125b类似物或干扰SEMA4C表达提高MCF-7/PR和SKBR3/PR细胞对紫杉醇的敏感性。结论:mi R-125b在紫杉醇诱导的乳腺癌耐药细胞株EMT改变中下调,可能通过其靶基因之一SEMA4C在EMT形成中发挥关键的角色;上调mi R-125b或下调SEMA4C的表达可逆转EMT,利于临床乳腺癌辅助化疗方案的制定。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄啸原;用“印度阅兵”形容乳腺癌合适吗?[J];诊断病理学杂志;2001年02期

2 张嘉庆,王殊,乔新民;乳腺癌的现状和远景[J];中华外科杂志;2002年03期

3 张维彬,汪波,石灵春;中医药在现代乳腺癌治疗中的运用[J];中国中西医结合急救杂志;2002年01期

4 薛志勇;食物与乳腺癌[J];山东食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建军,郑国华;乳腺癌相关标志物的研究进展[J];山东医药;2002年33期

6 陆尚闻;;男人也患乳腺癌[J];环境;2003年12期

7 ;新技术清晰拍摄早期乳腺癌细胞[J];上海生物医学工程;2005年04期

8 田富国;郭向阳;张华一;;乳腺癌诊治研究新进展[J];肿瘤研究与临床;2005年S1期

9 马涛,谷俊朝;血管内皮生长因子与乳腺癌的临床研究进展[J];国外医学(外科学分册);2005年01期

10 郭庆良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相关性研究进展[J];国外医学.外科学分册;2005年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治疗融合蛋白[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

2 郭红飞;;中医治疗乳腺癌的策略[A];江西省中医、中西医结合肿瘤学术交流会论文集[C];2012年

3 庞朋沙;伍会健;;乳腺癌治疗靶标的研究进展[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年

4 陆劲松;邵志敏;吴炅;韩企夏;沈镇宙;;新型维甲酸抑制乳腺癌细胞的生长及诱导凋亡的机制研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 刘爱国;胡冰;;乳腺癌临床治疗进展[A];安徽省抗癌协会第四次代表大会暨乳腺癌、肺癌专业委员会成立会议、安徽省肿瘤防治进展学术研讨会论文汇编[C];2001年

6 张嘉庆;王殊;乔新民;;乳腺癌的现状和远景[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年

7 刘清俊;;乳腺癌综合治疗的新进展[A];山西省抗癌协会第六届肿瘤学术交流会论文汇编[C];2003年

8 邵志敏;;21世纪乳腺癌治疗的展望[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

9 陈松旺;张明;;乳腺癌治疗的回顾与展望[A];西部地区肿瘤学学术会议论文汇编[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凯阳;王兆钺;阮长耿;;组织因子途径抑制物-2在乳腺癌细胞中的表达研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 ;血检有望揭示乳腺癌治疗效果[N];医药经济报;2004年

2 记者 郑晓春;乳腺癌细胞扩散基因被找到[N];科技日报;2007年

3 中国军事医学科学院肿瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新疗法[N];中国妇女报;2002年

4 王艳红;抑制ＤＮＡ修补可消灭乳腺癌细胞[N];医药经济报;2005年

5 詹建;乳腺癌饮食 两个时期不一样[N];中国中医药报;2006年

6 辛君;乳腺癌扩散基因“浮出水面”[N];大众卫生报;2009年

7 记者 毛黎;美发现有效抑制乳腺癌细胞生长的分子[N];科技日报;2010年

8 记者 吴春燕　通讯员 王丽霞;乳腺癌治疗将有新途径[N];光明日报;2011年

9 王乐　沈基飞;我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物[N];科技日报;2011年

10 刘霞;一种天然分子能阻止乳腺癌恶化[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 柴红燕;疾病状态下CYP4Z1和4A的生物学行为及其药物干预研究[D];武汉大学;2012年

2 李凯;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白调控乳腺细胞的分化并影响乳腺癌的预后[D];复旦大学;2014年

3 江一舟;乳腺癌新辅助化疗前后基因变异检测及其功能论证[D];复旦大学;2014年

4 马邵;酪氨酸去磷酸化增强表皮生长因子受体在乳腺癌治疗中靶向性的研究[D];山东大学;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基转移酶PRMT7诱导乳腺癌细胞发生表皮—间质转换及转移的作用机制研究[D];东北师范大学;2015年

6 侯培锋;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上调缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)诱发高致瘤性干细胞样乳腺癌细胞机制研究[D];福建医科大学;2014年

7 李丽丽;分泌蛋白SHON调控乳腺癌细胞EMT的分子机制研究[D];东北师范大学;2015年

8 陈丽艳;PI3K抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乳腺癌协同杀伤作用的分子机制研究[D];延边大学;2015年

9 朴俊杰;乳腺癌差异基因筛选及PAIP1对其生物学行为的影响[D];延边大学;2015年

10 汪[?如;染色体6q25.1区域基因多态性与乳腺癌遗传易感性的关联研究[D];南方医科大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杜文英;乳腺癌分子亚型的临床与病理特点[D];郑州大学;2011年

2 贾晓菲;彩色多普勒超声与乳腺癌病理及免疫组化指标的相关性研究[D];内蒙古大学;2015年

3 靳文;乳腺癌全基因组DNA甲基化修饰的研究[D];内蒙古大学;2015年

4 吴坤琳;TLR4/MyD88信号通路对乳腺癌侵袭性影响的实验研究[D];福建医科大学;2015年

5 葛广哲;树，

本文编号：1219204