PSMA在肝细胞性肝癌中的作用机制研究

发布时间：2017-11-24 10:07

  本文关键词：PSMA在肝细胞性肝癌中的作用机制研究

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【摘要】：研究目的：前列腺特异性膜抗原(PSMA)是一种前列腺上皮细胞Ⅱ型跨膜糖蛋白,高度表达于前列腺上皮。既往研究表明,PSMA高度表达于前列腺癌、胰腺癌、肾癌、乳腺癌、胃肠道腺癌等。本研究初步研究PSMA在肝细胞性肝癌组织及正常肝组织中的表达情况,研究PSMA在肝细胞性肝癌组织血管及肝正常组织血管中的表达情况,并分析其相关性；进一步统计分析PSMA在肝癌组织及肿瘤血管中的表达情况与各临床参数间的关系(如患者的年龄、性别、肿瘤大小、临床分期及AFP数值等)。在此基础上进一步选取肝细胞性肝癌细胞系HepG2为研究对象,细胞功能学实验研究PSMA在肝细胞性肝癌恶性增殖中的作用。研究方法：1.选取云南省肿瘤医院病理标本库2011-2014年肝细胞性肝癌石蜡标本76例,昆明医科大学第二附属医院2011-2014年正常肝组织石蜡标本40例。标本使用ABCAM公司的PSMA抗体进行免疫组化检测,并统计分析其与临床病理参数的关系。2.复苏并培养肝癌细胞系HepG2和肝正常系QSG-7701, Western blotting检测两株细胞中PSMA基础表达情况。3. 以HepG2细胞系作为研究对象,siRNA转染HepG2细胞系,敲除HepG2中的内源性PSMA, Western blotting验证敲减后PSMA的蛋白表达水平。4.敲减HepG2细胞内源性PSMA,采用MTS法检测肝癌细胞的增殖,细胞计数绘制生长曲线,流式细胞术检测细胞周期变化情况,以研究PSMA与肝癌细胞系HepG2恶性增殖的关系。研究结果：1.免疫组化结果统计显示：PSMA在肝细胞性肝癌石蜡标本组织中肝癌细胞的阳性表达率为93.4%(71/76),在肝正常组织肝细胞中仅为20%(8/40),两者表达存在显著差异(P0.01)；且PSMA在肝细胞性肝癌组织血管中的阳性表达率为67.1%(51/76),在肝正常组织血管中的阳性表达率为5%(2/40),两者表达存在显著差异(P0.01);PSMA在肝细胞性肝癌肝癌细胞及肝癌血管中共表达率为61.8%(47/76),但在肝细胞性肝癌组织肝癌细胞和血管中的表达无统计学意义。进一步与临床病理参数统计分析,PSMA与肝细胞性肝癌患者的年龄、性别、组织分化程度及分期均无统计学意义,但与患者AFP (400U/ML,400U/ML)及HbsAb水平之间存在差异(P0.05)。2. Western blotting结果显示：PSMA在人肝细胞性肝癌细胞系HepG2中高表达；3. PSMA-siRNA转染HepG2细胞系后,Western blotting检测结果显示肝细胞性肝癌细胞系HepG2中内源性PSMA的表达被抑制；4.阻断内源性PSMA表达后,MTT细胞增殖实验及细胞计数生长曲线结果显示HepG2细胞增殖能力被抑制(P0.05)；流式细胞术检测周期结果显示阻断内源性PSMA表达后,肝癌细胞出现了G0/G1期阻滞(P0.05)。结论：PSMA的异常表达可能与HCC的恶性增殖密切相关。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

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本文编号：1221871