BCG-PPD对γδT细胞杀伤肺癌A549细胞作用的影响

发布时间：2017-11-25 10:33

  本文关键词：BCG-PPD对γδT细胞杀伤肺癌A549细胞作用的影响

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【摘要】：目的：研究卡介菌纯蛋白衍生物(Purified Protein Derivative of BCQBCG-PPD)对人外周血γδT细胞穿孔素和颗粒酶B表达的影响,并进一步探讨BCG-PPD对γδT细胞杀伤肺癌A549细胞的增效作用。方法：(1)制备γδT细胞：采用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),以唑来膦酸(Zoledronic acid, ZA,终浓度为5nmol/ml)及白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2,终浓度为200IU/ml)刺激扩增γδT细胞；(2)确定最佳效靶比例：培养9-14天后,用流式细胞仪测定PBMC中丫δT细胞的比例。按不同的效靶比例(Effector:target,E:T)将γδT细胞与肺癌A549细胞混合培养,48小时后用倒置显微镜观察肺癌A549细胞的生长状态,并使用乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)细胞毒性检测试剂盒检测γδT细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性,以确定最佳效靶比例。(3) BCG-PPD处理后相关指标检测：将γδT细胞与肺癌A549细胞按最佳效靶比例混合培养,并加入不同浓度的BCG-PPD处理,用倒置显微镜动态观察细胞的生长状况,48小时后使用LDH细胞毒性检测试剂盒检测γδT细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性,使用流式细胞仪检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶B的表达,并用透射电镜观察肺癌A549细胞的形态结构变化。结果：(1)体外刺激扩增9-14天后γδT细胞浓度从初始的(4.65±4.36)%增加到(83.82±2.18)%。(2)按不同效靶比例混合培养γδT细胞与肺癌A549细胞时,倒置显微镜下可观察到肺癌A549细胞生长状况的差异,γδT细胞的细胞毒性作用随效靶比例的升高而增强,最佳效靶比为20：1。(3)按20：1的效靶比例混合培养,并加入不同浓度的BCG-PPD处理后,流式细胞仪检测加入浓度为20IU/ml的BCG-PPD处理组γδT细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性最强,穿孔素、颗粒酶B的表达均显著高于未加入BCG-PPD组,倒置显微镜动态观察到肺癌A549细胞的生长形态较未加入BCG-PPD组变化更为明显,透射电镜观察到经γδT细胞作用后肺癌A549细胞膜完整性被破坏,核膜消失,染色质固缩、溶解。结论：从健康人外周血分离出来的γδT细胞于体外刺激扩增后,对肺癌A549细胞具有杀伤作用；BCG-PPD可增高γδT细胞穿孔素及颗粒酶B的表达,加速肺癌A549细胞形态改变,增强杀伤作用。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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