树突状细胞生长激素受体的检测

发布时间：2017-11-26 06:14

  本文关键词：树突状细胞生长激素受体的检测

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【摘要】：研究背景恶性肿瘤是威胁全球人类健康的头号杀手,传统治疗手段如手术、放疗、化疗虽有进展,但癌症患者的预后仍不能令人满意,发展新的治疗方式及策略迫在眉睫。过继性免疫治疗采集外周血、脐血或骨髓中的单个核细胞,对其进行培养、扩增及诱导,回输或转输回患者,起到有效抑制肿瘤细胞生长的作用,达到预防、控制肿瘤复发和转移的目的。近年来,对于肿瘤组织中树突状细胞的浸润程度与肿瘤转移及临床预后关系的报道日益增多。目前树突状细胞(dendritic cells,DCs)被认为是专职抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)中功能最强的,能够高效的激活初始型T细胞,引起免疫耐受和免疫激活,在机体免疫系统中不可或缺。但是机体内DC细胞群的存在很少,对于临床治疗与科研的需求不能达到满意。伴随着DC基础性研究的深入进展,对DC的体外诱导培养技术也获得了很大的进步。对单核细胞应用白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)共同刺激获取细胞群组,这一时期的DC处于未成熟状态,而再加入CD40L、炎症因子、IL-1等刺激信号后,就能诱导DC分化成熟,并且具有不同的功能表型。生长激素(growth hormone,GH)是一种大分子蛋白质,能促进机体的生长发育、新陈代谢等过程。由于细胞膜的滤过作用,GH往往不能直接穿透作用于细胞。细胞膜表面存在有生长激素受体(growth hormone receptor,GHR),GH要发挥生物活性就要与其结合,形成小分子聚合物透过细胞膜,通过其他信号分子的刺激表达GH的生物活性,并极高效的形成酶联催化效应。目的体外应用IL-4及GM-CSF联合诱导培养人脐血来源树突状细胞,并应用荧光定量PCR、western-blot、免疫荧光及免疫组化检测生长激素受体的表达,并探讨其临床意义。方法严格遵循无菌操作,将10组人脐带血采用淋巴细胞分离液离心,获得脐血单核细胞,应用白细胞介素-4(IL-4)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony stimulating factor GM-CSF)诱导刺激单核细胞,获得树突状细胞。设计将提取淋巴细胞后,诱导表达前淋巴细胞为对照组,诱导表达后为树突状细胞组,进行免疫荧光,免疫组化,荧光定量PCR及蛋白质印记法检测生长激素受体表达量,并进行统计分析。结果脐血单核细胞在终浓度为5ng/ml的IL-4及10ng/ml的GM-CSF诱导下分化为成熟DCs。镜下观察荧光免疫及免疫组化染色的DC,其细胞核染色加深,阳性率高;DCGHR基因和内参基因的q RT-PCR中m RNA的相对表达量分别为75.3和24.7(P0.05);Western结果示:与诱导前相比,诱导后的GHR蛋白表达相对灰度值增高,分别为0.2047±0.0231、0.5823±0.0493(P0.05)。结论脐血单个核细胞可在体外经细胞因子组合诱导成为DC。DC细胞生长激素受体呈阳性高表达。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.51

【参考文献】

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1 ;Effect of a cancer vaccine prepared by fusions of hepatocarcinoma cells with dendritic cells[J];World Journal of Gastroenterology;2001年05期

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本文编号：1228831