二萜类化合物联合COX-2抑制剂体外对人骨肉瘤MG-63细胞的影响

发布时间：2017-11-28 23:25

  本文关键词：二萜类化合物联合COX-2抑制剂体外对人骨肉瘤MG-63细胞的影响

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【摘要】：骨肉瘤是最常见的原发性恶性肿瘤多见于儿童和青少年,取决于受影响的元素主要有三种类型,成骨细胞,软骨细胞和成纤维细胞。目前治疗骨肉瘤主要方法是手术和辅助化疗,尽管随着辅助疗法的进步,患者的生存率大幅提高,然而出现更多转移、化疗药物的耐药性及副作用导致患者的预后较差,因而迫切需要开发一个新的替代方案是十分必要的。本研究先用贝壳杉烷二萜类化合物冬凌草甲素联合COX-2抑制剂塞来昔布干预骨肉瘤细胞MG-63观察生长的影响,并以毛萼乙素和吗伐考昔为例进一步了解此两类化合物对骨肉瘤的作用机制。第一章：冬凌草甲素联合塞来昔布对人骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响目的：检测二萜类化合物冬凌草甲素联合COX-2抑制剂塞来昔布对人骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法：MTT法检测不同浓度的冬凌草甲素和塞来昔布在各时间点单药和联合干预MG-63后细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测冬凌草甲素和塞来昔布单药和联合干预MG-63后细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测COX-2和凋亡调节因子(Bc1-2、survivin和Bax) mRNA及蛋白的表达水平。结果：冬凌草甲素、塞来昔布单药和联合干预后,骨肉瘤MG-63细胞的增殖明显受抑制,呈剂量依赖性,且两药有协同作用。冬凌草甲素、塞来昔布联合干预组较空白组和各单药组细胞的凋亡率增加。联合干预组较空白组和各单药组COX-2、Bcl-2和Survivin mRNA及蛋白的表达量明显下调,而Bax mRNA及蛋白表达量明显上调。结论：冬凌草甲素联合塞来昔布可协同抑制MG-63细胞,这一过程可能与COX-2的表达受到抑制和凋亡调节因子(Bcl-2、Survivin 和 Bax)表达有关。第二章：ERK1/2信号通路介入毛萼乙素诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡及自噬目的：探讨二萜类化合物毛萼乙素(EriB)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡及自噬的影响,并探讨可能的作用机制。方法：MTT法检测不同浓度的EriB在各时间点干预MG-63后细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测EriB(1.5 μmol/L)干预MG-63后细胞的凋亡率。实时荧光定量PCR法检测EriB(1.5 μmol/L)单独干预和先用ERK1/2抑制剂U0126(50μmol/L)阻断30min后再用EriB(1.5μmol/L)干预MG-63后凋亡因子(Bcl-2和Bax)和自噬因子Beclin-1mRNA的表达水平。蛋白质印迹法检测EriB(1.5μ mol/L)在多个时间点干预MG-63后ERK1/2的磷酸化水平及EriB(1.5μmol/L)单独干预和先用U0126阻断30min后再用EriB(1.5μmol/L)干预MG-63后凋亡因子survivin和自噬因子LC3中LC3-Ⅱ蛋白的表达水平。结果：EriB干预后,骨肉瘤MG-63细胞的增殖明显受抑制,呈时间剂量依赖性。EriB干预后,MG-63细胞凋亡率增加。EriB单独干预组较空白组Bcl-2 mRNA和Survivin蛋白的表达量明显下调,而Bax和Beclin-1 mRNA及LC3-Ⅱ蛋白表达量明显上调；EriB干预后p-ERK1/2与ERK1/2的比值在6h达到峰值；U0126阻断后再用EriB干预组较EriB单独干预组Bcl-2 mRNA和Survivin蛋白的表达量明显上调,而Bax和Beclin-1 mRNA及LC3-Ⅱ蛋白表达量明显下调；U0126阻断后再用EriB干预组较U0126单独阻断组相关mRNA和蛋白的变化不明显。结论：毛萼乙素可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,诱导其凋亡和自噬,这可能与MAPK/ERK1/2信号通路的介入有关。第三章：P38信号通路介入吗伐考昔诱导的人骨肉瘤细胞MG-63凋亡目的：探讨一种长效环氧合酶-2(COX-2)抑制剂吗伐考昔,对体外培养的人骨肉瘤细胞MG-63生长的影响及可能的机制。方法：用MTT法检测不同浓度吗伐考昔在各时间点对MG-63细胞的生长抑制率,并观察其有效的作用浓度；蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测吗伐考昔单独干预M G-63细胞后凋亡调节因子Bcl-2、Bax和Survivin蛋白及mRNA的表达；蛋白质印迹法检测吗伐考昔干预MG-63细胞后P38蛋白的表达。结果：吗伐考昔可抑制MG-63细胞的增值。吗伐考昔干预MG-63细胞可引起凋亡调节因子Bc1-2、Survivin蛋白及mRNA的下调,Bax蛋白及mRNA的上调。吗伐考昔干预MG-63细胞可促使P38信号通路蛋白的活化。结论：吗伐考昔可通过诱导MAPK通路P38活化而影响人骨肉瘤细胞MG-63凋亡。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R738.1

【参考文献】

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1 戴体俊;合并用药的定量分析[J];中国药理学通报;1998年05期

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本文编号：1235393