染色体6q22.2区域基因多态性与肺癌易感性的关联研究

发布时间：2017-11-29 06:18

  本文关键词：染色体6q22.2区域基因多态性与肺癌易感性的关联研究

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【摘要】：目的在我国,肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率均居首位。肺癌的发生是一个复杂的过程,受到环境因素和遗传因素的影响。全基因组关联研究(GWAS)对整个基因组的变异进行分析,被认为是研究复杂疾病的一种有效方法。近年来GWAS研究已经确定了多个与肺癌易感性有关的多态位点,但是这些位点的生物学功能仍然未知,后GWAS的功能SNP的研究至关重要,为肺癌的分子机制研究提供依据。本研究对前期GWAS发现的肺癌易感性位点rs9387478进行连锁不平衡分析,通过病例对照关联研究和功能研究揭示其分子机制。方法本研究对前期GWAS发现的肺癌易感性位点rs9387478进行连锁不平衡分析,筛选出4个具有潜在功能的SNP位点(rs17079281、rs6911915、rs9320604、rs4946259)进行进一步病例对照研究和功能探索。从天津医科大学肿瘤医院组织库选取经病理组织学确诊的766例病例;773例对照来自同期健康体检人群,与病例组按性别和年龄进行频数匹配。通过查阅患者病历获得临床病理资料,电话或查阅门诊记录方法获得随访信息,对照组的一般情况通过现场问卷调查获得。收集病例组和对照组的血标本提取基因组DNA,利用Taqman探针基因分型技术检测SNP位点的基因型。结合临床资料,采用多因素非条件logistic回归和COX回归分析在共显性模型、显性模型、隐形模型中基因多态性与肺癌发病和预后的关系。利用生物学信息预测与肺癌易感性有关SNP的潜在功能。荧光素酶报告基因实验检测基因多态性对靶基因转录活性的影响。收集253例肺癌组织标本,用实时荧光定量PCR方法检测肺癌组织中DCBLD1、YY1 m RNA的表达并分析其与基因多态性及患者临床病理学特征的关系。在肺癌细胞A549和H1299中,用RNAi MAX转染DCBLD1 si RNA下调DCBLD1的表达,用Lipofectamine 3000转染YY1过表达质粒上调YY1的表达。MTT、细胞划痕和Transwell迁移及侵袭实验分析DCBLD1和YY1对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果本研究选取4个与SNP rs9387478高度连锁不平衡(D’0.8)的多态性位点进行基因型检测和统计分析。结果显示除了rs9320604、rs4946259外,rs17079281、rs6911915均符合HWE平衡(P0.05)。病例对照研究分析发现在共显性模型中rs17079281、rs6911915与肺癌的发病危险有关;与携带rs17079281CC基因型相比,CT基因型的携带者有较低的发病危险(OR=0.74;95%CI:0.58-0.94);rs6911915 CT基因型与TT基因型相比,肺癌发病风险较低(OR=0.77;95%CI:0.59-0.99);rs9320604、rs4946259与肺癌发病风险无关。在显性模型中分析发现与rs17079281 CC基因型相比,T基因型携带者有较低的肺癌发病风险(OR=0.78;95%CI:0.63-0.98);其他多态性位点与肺癌发病风险无关。基因与环境的交互作用分析发现4个基因多态性位点与吸烟的相乘交互作用没有统计学意义(P0.05)。本研究未发现与肺癌预后有统计学关联的多态性位点。生物学信息预测发现多态性位点rs17079281影响转录因子YY1与DCBLD1启动子区的结合;荧光素酶luciferase报告基因实验结果显示转录因子YY1与rs17079281 T等位基因结合,抑制转录活性。携带T等位基因与CC基因型相比,肺癌组织中DCBLD1m RNA表达量有下调的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。DCBLD1m RNA表达量在不同性别、吸烟状态、病理学类型间存在统计学差异(P0.05);YY1m RNA表达量在不同性别、吸烟状态、病理学类型、临床分期中存在统计学差异(P0.05)。体外功能实验结果显示下调DCBLD1的表达A549和H1299的迁移和侵袭能力;上调YY1的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论DCBLD1启动子区SNP rs17079281与肺癌发病风险相关,影响转录因子YY1与启动子区的结合,调控DCBLD1基因的表达。DCBLD1和YY1的异常表达影响肺癌细胞A549和H1299细胞的肿瘤生物学行为。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
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本文编号：1236491