Kiss-1对结肠癌SW480细胞增殖和迁移的影响

发布时间：2017-12-05 02:26

  本文关键词：Kiss-1对结肠癌SW480细胞增殖和迁移的影响

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【摘要】：目的:本实验通过构建p EGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒,将其转染至结肠癌SW480细胞株,G418筛选获得稳定表达的细胞株,检测Kiss-1基因对结肠癌SW480细胞增殖及迁移能力的影响,分析其与结肠癌SW480细胞生物学特性的影响,为Kiss-1在结肠癌防治作用提供理论依据。方法:构建p EGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒,通过脂质体转染方法,将Kiss-1基因导入结肠癌SW480细胞,经G418抗性筛选构建稳定转染细胞株,筛选4周后在荧光显微镜下观察细胞转染情况。将SW480细胞设为空白对照组,将转染p EGFP-N1空载体质粒的SW480细胞设为阴性对照组,将转染p EGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒的SW480细胞设为实验组。采用Western blotting法检测各组细胞中Kiss-1基因编码的蛋白(Kisspeptin)表达量;采用Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)法检测各组细胞的数量,分析Kiss-1对SW480细胞增殖的影响;采用细胞划痕实验(Scratch wound healing assay)检测Kiss-1对SW480细胞迁移能力的影响。结果:1.构建p EGFP-N1-Kiss-1重组真核表达质粒,目的基因经BLAST基因测序显示合成序列与Gen Bank中Kiss-1 c DNA序列完全吻合,表明重组质粒构建成功。2.Lipofectamine 2000介导p EGFP-N1和p EGFP-N1-Kiss-1转染结肠癌SW480细胞,经G418抗性筛选,荧光显微镜下观察细胞可见阴性对照组和实验组细胞恒定表达绿色荧光蛋白。结果提示稳定转染细胞株构建成功。3.提取各组细胞的总蛋白,Western blotting检测各组细胞中Kiss-1基因编码的蛋白表达量,实验组SW480细胞Kisspeptin表达量较空白对照组及阴性对照组增加,差异有统计学意义(P0.05)。结果提示Kiss-1基因稳定转染后,SW480细胞Kisspeptin表达增加。4.CCK8实验显示实验组SW480细胞的细胞数明显低于相同时间点(24h,48h,72h)空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05)。提示Kiss-1基因可以抑制SW480细胞增殖能力。5.细胞划痕实验显示:划痕后24小时实验组细胞迁移率(8.1%±5.5%)低于空白对照组(26.6%±11.4%)和阴性对照组(33.6%±8.7%),差异有统计学意义(P0.05);同样,48小时实验组细胞迁移率(13.6%±5.7%)低于空白对照组(55.5%±14.2%)和阴性对照组(50.5%±10.0%),差异有统计学意义(P0.05)。提示Kiss-1基因可以抑制SW480细胞迁移率。结论:Kiss-1可抑制结肠癌SW480细胞的增殖,降低细胞迁移率,Kiss-1基因参与了结肠癌细胞发生与转移的调控。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35

【参考文献】

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1 王艳;;KISS-1基因在食管癌组织中表达的临床意义[J];胃肠病学和肝病学杂志;2014年04期

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本文编号：1253247