UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac的相互作用以及下调HepG2肝癌细胞中H3K9ac水平

发布时间：2017-12-06 00:17

  本文关键词：UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac的相互作用以及下调HepG2肝癌细胞中H3K9ac水平

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【摘要】：目的研究UHRF2与组蛋白H3乙酰化(H3K9ac和K3K14ac)的相互作用及两者相互作用结合区域的鉴定。探讨UHRF2分别在正常细胞和癌细胞中对K3K9ac和H3K14ac的影响及其分子机制。方法1. 在HEK293、LO2和HepG2细胞中转染UHRF2,进行免疫荧光后,激光共聚焦检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在细胞内的共定位现象。再在上述细胞中转染UHRF2和空载质粒,采用免疫沉淀技术,研究UHRF2与H3K9ac和H3K14ac的相互作用。2. 通过双酶切鉴定UHRF2各缺失体质粒,将各缺失体质粒转染HEK293、LO2和HepG2细胞,进行免疫沉淀实验。研究UHRF2与H3K9ac和H3K14ac相互作用的结合区域。3. 通过免疫印迹和免疫组化化学方法检测内源性UHRF2、H3、 H3K9ac和H3K14ac蛋白在HEK293、LO2和HepG2细胞中以及在肝癌和癌旁组织中的表达情况。4. 采用瞬时转染技术上调UHRF2蛋白,通过免疫印迹检测UHRF2在HEK293、LO2和HepG2细胞中对H3K9ac和H3K14ac影响。同时通过免疫组织化学检测肝癌标本中UHRF2蛋白水平的高低与H3K9ac和H3K14ac蛋白表达情况的相关性。结果1. 激光共聚焦实验结果显示：UHRF2与H3、H3K9ac和H3K14ac在HEK293、LO2和HepG2细胞内均有存在共定位现象。免疫沉淀实验结果表明:UHRF2与H3K9ac在上述细胞中相结合存在相互作用。2. 免疫沉淀实验结果表明：在HEK293、LO2和HepG2细胞中PHD结构域是UHRF2与H3K9ac相互作用的关键结合区域,此外在HepG2细胞中除了PHD结构域外,YDG结构域也是UHRF2与H3K9ac相互作用关键结合区域。3. 免疫印迹结果显示：H3K9ac和H3K14ac在HepG2肝癌细胞中高表达。免疫组织化学结果显示：UHRF2、H3K9ac和H3K14ac在肝癌组织中高表达。4. Western blot结果表明：上调UHRF2后,在HEK293和L02正常细胞中H3K9ac蛋白表达增多,而在HepG2肝癌细胞中H3K9ac蛋白表达减少。同时免疫组织化学结果表明：H3K9ac蛋白在高表达UHRF2的肝癌组织较低表达UHRF2的肝癌组织少。结论UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac相互作用。在HepG2肝癌细胞中,过表达UHRF2下调H3K9ac蛋白的表达水平。UHRF2调节H3K9ac的分子机制有待进一步研究。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

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本文编号：1256708