GKN2在胃癌中的表达及对MKN28细胞的抑制作用

发布时间：2017-12-07 01:09

  本文关键词：GKN2在胃癌中的表达及对MKN28细胞的抑制作用

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【摘要】：[目的]GKN2(Gastrokin 2,胃动蛋白2)在正常胃组织中特异表达,而在胃癌中表达下降或缺失,被认为可能发挥着抑癌基因的作用,GKN2常常与另一个分泌蛋白TFF1(Trefoil factor1)形成异质二聚体,在正常胃部发挥保护胃上皮内稳态的作用。本研究首先检测胃癌、癌旁组织以及胃癌远端胃粘膜组织中GKN2和TFF1蛋白的表达,并分析GKN2和TFF1在胃癌表达中的相关性;接着观察GKN2高表达对MKN28细胞生长的影响,以初步阐明GKN2作为抑癌基因的作用,为其用于胃癌的临床预防和治疗提供理论基础和实验依据。[方法]我们首先运用组织芯片和免疫组化SP法中检测胃癌远端胃粘膜、癌旁组织和胃癌中GKN2和TFF1蛋白的表达情况,分析其临床病理意义。其次,将构建好的GKN2基因真核表达载体(Xhol_GKN3SP-h GKN2-TEV-SBP_Xhol),转染人胃癌MKN28细胞,G418筛选,建立稳定转染细胞株,q RT-PCR和Western Blot验证GKN2在MKN28细胞中表达。采用MTT法分析GKN2高表达对MKN28细胞增殖的影响,Transwell迁移实验和侵袭实验分析GKN2高表达对MKN28细胞迁移和侵袭的影响。[结果]组织芯片和免疫组化结果发现,GKN2在胃癌远端胃粘膜、癌旁胃组织和胃癌组织中的表达率分别为83.36%(19/22)、43.75%(21/48)和6.67%(6/90),差异均有统计学意义(P0.05);TFF1在胃癌远端胃粘膜和癌旁胃组织的表达率分别为81.82%(18/22)、62.50%(30/48),但差异无统计学意义(P0.05),而胃癌组织中的表达率21.11%(19/90),明显低于胃癌远端胃粘膜和癌旁胃组织(P0.05)。以上结果提示胃癌组织中GKN2、TFF1表达均明显下调,但相关性分析结果显示胃癌组织中GKN2、TFF1表达没有相关性(P0.05)。我们将Xhol_GKN3SP-h GKN2-TEV-SBP_Xhol表达载体转染MKN28细胞,建立了GKN2高表达的稳定转染MKN28细胞株。Western blot结果显示,GKN2转染组GKN2蛋白表达(0.91±0.03)较未转染组(0.17±0.01)和空载体组(0.20±0.01)明显上调,差异有统计学意义(P0.05);实时荧光定量PCR结果同样显示,转染组MKN28细胞中GKN2的m RNA表达(1.00±0.01)明显高于未转染组(0.62±0.02)和空载体组(0.64±0.02)(P0.05),提示转染成功。MTT结果显示:转染GKN2的人胃癌MKN28细胞,其在培养24h后的OD570值为(0.15±0.02),明显低于未转染组(0.24±0.03)和空载体组(0.25±0.03)(P0.05),培养48h、72h后也是一样的变化,提示GKN2可抑制人胃癌MKN28细胞增殖。Transwell迁移实验发现,GKN2转染组穿过膜的细胞数(26±5)相比未转染组(110±4)及空载体组(109±7)明显减少(P0.05);Transwell侵袭实验显示,GKN2转染组穿过基质胶的细胞数(28±4)少于未转染组(67±5)及空载体组(66±7)(P0.05),以上结果证明GKN2高表达可抑制MKN28细胞的迁移和侵袭能力。[结论]1.GKN2、TFF1在胃癌组织中的表达明显低于癌旁胃组织和胃癌远端胃粘膜,说明GKN2、TFF1蛋白表达水平下调与胃癌的发生相关;2.GKN2高表达可抑制人胃癌MKN28细胞的增殖、迁移和侵袭。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

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1 刘姣;GKN2在胃癌中的表达及对MKN28细胞的抑制作用[D];南华大学;2015年

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