单分子力谱研究核酸适配体与Bel-7404细胞的相互作用

发布时间：2017-12-07 02:10

  本文关键词：单分子力谱研究核酸适配体与Bel-7404细胞的相互作用

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【摘要】：作为一种新型的能以癌细胞为靶标的识别分子,核酸适配体因其具有高特异性、高亲和力等优点已在生物传感、诊疗等研究领域引起了关注。在这些研究中,核酸适配体通常需要被固定到一个表面上。为了确保固定化的核酸适配体探针对靶细胞的高特异性、高亲和力,核酸适配体的固定化方法起着至关重要的作用。因此,有必要在活细胞水平上研究不同的固定化方法对核酸适配体与靶细胞相互作用的影响。本论文选取人肝癌细胞株Bel-7404为例,利用单分子力谱较为系统地研究了核酸适配体的固定化方法对Bel-7404细胞与其核酸适配体ls2n相互作用的影响,并进一步考察了重金属离子对二者相互作用的影响。内容包括:1.利用单分子力谱研究了核酸适配体的不同固定化方法对Bel-7404细胞与其核酸适配体ls2n相互作用的影响。在近生理条件下,系统地考察了核酸适配体的不同修饰末端(3’端或5’端)、不同延长手臂(T手臂或碳链手臂)、不同交联剂的选择(PEG或戊二醛作为交联剂)对核酸适配体与Bel-7404细胞相互作用的影响。结果表明:(1)与核酸适配体的3’端作为修饰末端相比,核酸适配体的5’端作为修饰末端时核酸适配体与Bel-7404细胞相互作用的结合几率更高,说明5’端作为修饰末端更有利于核酸适配体与Bel-7404细胞结合;(2)与未延长手臂相比,延长T碱基作为手臂均能明显提高核酸适配体对Bel-7404细胞的识别能力。但是延长碳链作为手臂时,仅能略微提高以戊二醛作为交联剂时的核酸适配体与Bel-7404细胞相互作用的结合几率,而对以PEG作为交联剂时的二者相互作用的结合几率几乎没有影响,因此T手臂比碳链手臂更有效;(3)与以戊二醛为交联剂时相比,以PEG作为交联剂时核酸适配体与Bel-7404细胞相互作用的结合几率更高。因此,PEG修饰方法比戊二醛修饰方法更优。该研究将为基于核酸适配体的化学生物传感设计提供重要参考。2.利用单分子力谱研究了重金属离子Cd~(2+)、Hg~(2+)对核酸适配体ls2n与Bel-7404细胞相互作用的影响。当Bel-7404细胞经不同浓度的Cd~(2+)或Hg~(2+)处理后,考察了核酸适配体与Bel-7404细胞的相互作用情况。结果表明,随着Cd~(2+)、Hg~(2+)浓度的增大,核酸适配体与Bel-7404细胞的结合几率明显下降,但是核酸适配体与细胞的相互作用力增大。这可能是Cd~(2+)、Hg~(2+)影响了Bel-7404细胞的正常生理代谢,进而影响了Bel-7404细胞上的核酸适配体相应靶标的正常表达;或者是Cd~(2+)、Hg~(2+)引起了Bel-7404细胞的结构发生了改变所致。该研究结果有望为复杂体系中生物分子间相互作用的研究提供有价值的参考信息。
【学位授予单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-3

【参考文献】

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本文编号：1260767