Cx43通过抑制EMT逆转人肺腺癌细胞A549对顺铂的获得性耐药

发布时间：2017-12-07 02:14

  本文关键词：Cx43通过抑制EMT逆转人肺腺癌细胞A549对顺铂的获得性耐药

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【摘要】：目的:观察Cx43对人肺腺癌细胞A549的获得性耐药的影响,以及与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法:采用MTT法确定耐药株,用不同浓度的顺铂(0,20,40,80,160,320μM)分别作用人肺腺癌敏感株(A549)和人肺腺癌耐顺铂耐药株(A549/CDDP)48 h后测定细胞存活率,确定耐药指数。1.采用Western blotting法检测A549和A549/CDDP中Cx43及EMT标志蛋白上皮钙粘附素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail,Slug的表达,及干扰和过表达Cx43后EMT相关蛋白的表达。2.采用Si RNA小干扰的方法下调Cx43的表达,用过表达方法上调Cx43的表达。3.采用Transwell法检测A549和A549/CDDP的侵袭能力,以及干扰或过表达Cx43后细胞的侵袭能力。4.采用划痕实验来检测A549和A549/CDDP的转移能力,以及干扰或过表达Cx43后细胞的转移能力。5.统计学方法:组间数据分析采用SPSS13.0软件进行t检验。结果:1.耐药株的鉴定M TT结果显示:A549/CDDP的IC50=311.2μM,A549的IC50=53.6μM,RI=5.8,结果显示A549/CDDP对顺铂产生了获得性耐药。2.A549/CDDP细胞与A549细胞相比发生了EMT转化Western blotting的结果显示与A549相比A549/CDDP细胞中的上皮标志蛋白E-cadherin的表达显著降低,而间质标志蛋白Vimentin的表达显著增强,转录因子Snail、Slug的表达也显著增强。3.与A549细胞相比A549/CDDP细胞的侵袭转移能力显著增强细胞侵袭转移能力的获得是EMT改变的重要标志,Transwell和划痕的实验结果表明,与A549相比A549/CDDP细胞的侵袭转移能力显著增强。4.与A549细胞相比A549/CDDP细胞中Cx43的表达量显著降低Western blotting结果表明,与A549相比A549/CDDP细胞中的Cx43的表达量显著降低,此差异具有统计学意义。5.上调Cx43的表达可逆转A549/CDDP细胞的EMT转化采用过表达技术将含目的基因的质粒(pc DNA-Cx43)与空质粒(pc DNA)分别转染进入A549/CDDP细胞中,在显微镜下观察细胞形态发现与pc DNA相比pc DNA-Cx43组过表达Cx43后细胞的形态重新变得圆润,细胞间粘附增强;Western blotting结果显示:与pc DNA相比pc DNA-Cx43组过表达Cx43后E-cadherin的表达显著增强而间质标志蛋白Vimentin的表达显著降低,转录因子Snail,Slug的表达也显著降低。6.下调Cx43的表达可诱导A549细胞发生EMT转化采用基因敲除技术将含目的基因的小干扰片段(si RNA-Cx43)与空质粒(NC)分别转染进入A549细胞中在,在A549细胞中沉默Cx43的表达后,Western Blottin结果显示:与NC组相比si RNA-Cx43的E-cadherin的表达显著降低而间质标志蛋白Vimentin的表达显著增强,转录因子Snail,Slug的表达也显著增强。7.Cx43可调控人肺腺癌细胞的侵袭转移能力Transwell实验和划痕的实验结果表明在A549/CDDP细胞中过表达Cx43后,侵袭转移能力显著降低;Transwell实验和划痕的实验结果表明在A549/CDDP细胞中沉默Cx43的表达后,侵袭转移能力显著增强。8.Cx43可调控人肺腺癌细胞对顺铂的敏感性结果显示,在A549/CDDP细胞中过表达Cx43后,对CDDP的敏感性显著增强;在A549细胞中干扰Cx43后,对CDDP的敏感性显著降低。以上结果均表明Cx43可调控人肺腺癌细胞对CDDP的敏感性。结论:Cx43可调控人肺腺癌A549对顺铂的获得性耐药,可能与Cx43可抑制EMT的作用有关。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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本文编号：1260790