PTEN在胰腺癌增殖、侵袭及转移中的作用及相关机制的研究

发布时间：2017-12-07 22:29

  本文关键词：PTEN在胰腺癌增殖、侵袭及转移中的作用及相关机制的研究

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【摘要】：【背景】胰腺癌目前仍是全球范围内常见恶性肿瘤之一,其病死率高,生存期短,死亡率居恶性肿瘤的第四位。由于胰腺癌的发病特点,超过80%的胰腺癌病人确诊时已为晚期,并已失去了根治性手术治疗的机会,且放化疗、免疫治疗等手段对胰腺癌的生存率和预后无明显改善,其中位生存期仅为3-6个月,5年生存率小于5%,故探讨胰腺癌发生、发展及转移的相关机制对胰腺癌的诊治至关重要。PTEN是首个发现的能够编码具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶双重活性蛋白的基因,其在肿瘤抑癌基因中占据着重要的地位。目前发现大多数实质性肿瘤如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等都存在PTEN基因的突变、缺失或低表达,从而影响其肿瘤抑制功能,目前关于PTEN如何在胰腺癌的增殖及转移中发挥作用的研究仍相对较少。细胞自噬是继细胞凋亡后发现的另一种细胞程序性死亡,自噬水平的高低对细胞的生存具有重要影响。EMT则是细胞由上皮表型向间质表型的转化过程,其在胚胎发育、组织器官分化及肿瘤细胞的转移中发挥了重要作用。随着近些年对自噬及EMT的研究深入,PTEN与自噬及EMT的关系及其在胰腺癌发生发展中的作用及机制的相关研究引起广泛关注。【目的】我们利用构建稳定过表达及稳定敲除PTEN的胰腺癌细胞株,通过体内和体外实验来探究PTEN对胰腺肿瘤侵袭、转移和对细胞增殖、细胞周期的影响,通过检测自噬及EMT相关分子,进一步阐明PTEN与自噬及EMT的关系及其在胰腺癌发生、发展及转移中的作用机制。【方法】通过实时定量荧光PCR及蛋白免疫印迹的方法检测PTEN在不同胰腺癌细胞株中的表达情况,并在此研究基础上通过慢病毒感染的方法构建稳定过表达PTEN的MIAPa Ca-2-PTEN胰腺癌细胞株及稳定敲除PTEN的PANC-1/SW1990-PTEN sh RNA细胞株、对照PANC-1/SW1990-Scramble sh RNA细胞株。通过CCK-8细胞增殖实验,流式检测细胞周期,细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭转移实验,分别对PTEN在细胞增殖、侵袭及转移中的作用在细胞水平进行研究。通过裸鼠门静脉肝转移模型从动物水平对PTEN在胰腺癌侵袭转移中的作用进行研究。通过Western-blot对自噬相关分子LC3、Becline1,EMT相关分子E-cadherin、N-cadherin、snail等的检测,进一步探讨PTEN与自噬及EMT的关系及其在胰腺癌中的作用机制。【结果】1.成功构建稳定过表达PTEN的MIAPa Ca-2-PTEN胰腺癌细胞株及稳定敲除PTEN的PANC-1/SW1990-PTEN sh RNA细胞株、对照PANC-1/SW1990-Scramble sh RNA细胞株。2.PTEN抑制胰腺癌细胞的增殖,并且对细胞周期G1期有阻滞作用。3.PTEN的缺失导致胰腺癌细胞侵袭及转移的能力明显增强。4.建立裸鼠门静脉肝转移模型,通过体内实验验证了PTEN的缺失可以促进胰腺癌侵袭转移的发生。5.PTEN促进胰腺癌细胞自噬的发生。6.PTEN的缺失对胰腺癌上皮间质转化(EMT)的发生有促进作用。【结论】PTEN的丢失会导致胰腺癌增殖、侵袭及转移能力的增加。PTEN有增强细胞自噬及抑制EMT发生的作用。PTEN的缺失可能是通过抑制细胞自噬及促进EMT,从而促进细胞的增殖和转移的发生。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.9

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本文编号：1264050