自噬在姜黄素对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制和凋亡诱导中的作用研究

发布时间：2017-12-09 10:20

  本文关键词：自噬在姜黄素对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制和凋亡诱导中的作用研究

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【摘要】：研究目的:姜黄素(Curcumin),是从中药姜黄中提取的活性多酚,可以调节生物机体内的多条信号通路。大量的临床前研究以及临床研究已证实,姜黄素具有抗HIV、抗突变、神经保护等多种药理作用,也用作治疗许多慢性疾病,如糖尿病、过敏性疾病、神经退行性病、骨质疏松、肿瘤等。研究表明,姜黄素对乳腺癌、胃癌、前列腺癌、肺癌等多种恶性肿瘤均具有抑制作用。而针对目前许多肝癌晚期患者病死率高,术后易复发转移,且单纯化疗疗效不佳的现状。国内外研究者开展了大量有关姜黄素治疗原发性肝癌方面的基础研究,但具体机制仍未明了。本研究以人肝癌SMMC-7721细胞为研究对象,探究:(1)姜黄素对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究;(2)姜黄素对肝癌细胞自噬的影响及其相关信号通路研究;(3)自噬在姜黄素诱导肝癌细胞增殖抑制和凋亡中的作用研究;以期为天然抗癌成分,姜黄素的抗肿瘤机制及其在肝癌方面临床试验的开展提供理论依据。研究方法:1、以不同剂量姜黄素处理人肝癌SMMC-7721细胞一定时间后,以MTT法检测各组肝癌细胞活力,并以流式细胞术检测各组肝癌细胞凋亡率,并与空白对照组分析比较;2、以不同剂量姜黄素处理人肝癌SMMC-7721细胞一定时间后,提取各组细胞总蛋白,以Western Blot技术检测细胞自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、Beclin1、p62蛋白)及自噬相关信号通路蛋白(p-Akt、p-m TOR蛋白)的表达情况,以此分析姜黄素对肝癌细胞自噬及自噬相关信号通路的影响;3、以不同剂量姜黄素处理人肝癌SMMC-7721细胞一定时间后,以免疫荧光技术检测各组肝癌细胞自噬的发生情况,并与空白对照组分析比较;4、通过药理学干预自噬,以自噬特异性抑制剂(CQ/3-MA)预处理肝癌细胞,再以姜黄素处理肝癌细胞一定时间。分别以MTT法检测肝癌细胞活力,以流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率,以Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达,并与姜黄素单独处理组分析比较;研究结果:1、随着姜黄素浓度的升高及处理时间的延长,人肝癌SMMC-7721细胞的相对活力逐渐下降,同时,肝癌细胞凋亡率也随着姜黄素剂量的增加而上升,呈时间-剂量依赖关系;2、Western blot结果显示随着姜黄素剂量的不断增加,自噬相关蛋白(Beclin-1,LC3-II和p62蛋白)的表达量明显增加,并具有统计学意义(p0.05);此外,自噬相关信号通路蛋白(p-Akt、p-m TOR蛋白)的表达量随姜黄素浓度的增高逐渐下降,并具有统计学意义(p0.05)。提示在人肝癌SMMC-7721细胞,姜黄素可能通过抑制Akt/m TOR信号通路的活性来激活自噬;3、以自噬特异性抑制剂,氯喹(CQ)预处理人肝癌SMMC-7721细胞,再以姜黄素处理肝癌细胞一定时间。与姜黄素单独处理组对比,LC3-II蛋白的表达量明显上升,并具有统计学意义(p0.05);4、免疫荧光结果显示姜黄素促进了肝癌细胞浆内LC3绿色荧光的聚集,提示姜黄素诱了肝癌细胞自噬的发生;5、以自噬特异性抑制剂(CQ/3-MA)预处理人肝癌SMMC-7721细胞,再以姜黄素处理一定时间;结果显示与姜黄素单独处理组对比,肝癌细胞活力明显下降(p0.05),此外,细胞凋亡率也明显增加(p0.05);结论:姜黄素可明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖并诱导细胞凋亡,并呈时间-剂量依赖效应;同时,姜黄素可能通过抑制Akt/m TOR信号通路的活性,进而激活人肝癌SMMC-7721细胞自噬的发生。此外,自噬特异性抑制剂(CQ/3-MA)预处理肝癌细胞后,可明显增强姜黄素对肝癌细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。这对提高姜黄素治疗肝癌的临床疗效,改善患者的生命质量,都有着重大的意义。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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本文编号：1270057