TrkB在肾透明细胞癌中的表达及功能研究

发布时间：2017-12-10 00:07

  本文关键词：TrkB在肾透明细胞癌中的表达及功能研究

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【摘要】：目的：近来越来越多证据表明酪氨酸激酶受体B(Tyrosine kinase receptor B, TrkB)的异常表达与多种神经源性和非神经源性的肿瘤的恶性进展和预后密切相关。有研究报道TrkB在乳腺癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、肝癌和甲状腺髓样癌等不同类型的肿瘤中表达异常,以不同的方式发挥作用。然而TrkB在肾透明细胞癌中的表达如何,以及TrkB是以何种方式发挥作用,这些是我们还不了解的。本实验主要检测TrkB在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达情况,并观察过表达TrkB基因对肾透明细胞癌细胞系生物学行为变化的影响。方法：①实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测65对非转移性肾透明细胞癌及癌旁组织和24例转移性肾癌组织中TrkB的nRNA表达水平,蛋白免疫印迹(western-blot)以及免疫组化方法检测TrkB蛋白在非转移性肾透明细胞癌及其癌旁组织中的表达情况。②实时定量PCR和western-blot方法检测TrkB在肾透明细胞癌细胞系ACHN、Caki-1、769-P和786-O以及正常肾小管上皮细胞系HK2中的表达。③重组过表达TrkB的慢病毒质粒,培养稳定高表达TrkB的769-P和786-O肾癌细胞系。④MTS法检测稳转细胞株的增殖情况,划痕实验和Transwell实验验证其迁移和侵袭能力的变化。结果：①在mRNA水平,TrkB在非转移性肾癌组织中的表达较其癌旁组织低(P=0.009),而在转移性肾癌组织中其表达比癌旁组织高(P=0.03)。在蛋白水平,western-blot和免疫组化均提示非转移性肾癌组织中TrkB表达较其癌旁组织低。②在mRNA和蛋白水平,非转移性肾透明细胞癌细胞系(769-P、786-O)的TrkB表达低于正常肾小管上皮细胞系,转移性肾透明细胞癌细胞系(ACHN、Caki-1)的TrkB表达高于正常肾小管上皮细胞系。③成功构建了重组过表达TrkB质粒,并进行慢病毒包装,成功培育了稳定过表达TrkB的769-P和786-0肾癌细胞系。④在769-P和786-O的细胞功能实验中,与空载体对照组相比,MTS实验显示过表达TrkB的细胞增殖能力下降;划痕实验显示过表达TrkB的迁移细胞数显著增多；Transwell实验显示过表达TrkB的穿膜细胞数显著增多(P均0.05)。结论：TrkB在肾透明细胞癌组织中的异常表达可能与肿瘤的生长、侵袭能力有关,在肾透明细胞癌的恶性进展中发挥重要作用。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
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本文编号：1272362