HER-2在骨肉瘤中的表达及筛选其适配子方法的研究

发布时间：2017-12-12 09:00

  本文关键词：HER-2在骨肉瘤中的表达及筛选其适配子方法的研究

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【摘要】：目的:研究人表皮生长因子受体2(Her-2)在骨肉瘤中的表达情况,探讨其表达的临床意义,并且利用SELEX(system evolution of Iigands by exponential enrichment)技术筛选与HER2蛋白特异性结合的适配子(aptamer)。方法:1.采用免疫组化SP法检测80例骨肉瘤组织中HER-2的表达,比较不同的临床参数与HER-2表达的相关性。2.在证实了HER-2与骨肉瘤发生发展有着关联的条件下,体外合成78个长度的碱基,并且含有35个随机寡核苷酸的ss DNA文库,次级ss DNA文库的制备是通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法得到的,且HER2蛋白的适配子是以微孔为介质的SELEX正反筛法获得。同时,每轮ss DNA与靶蛋白HER2的亲和力是通过生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测,最后,将亲和力最高的适配子群进行克隆、测序。最后,适配体群的一级结构和二级结构要采用生物学软件DNAMAN进行分析,将亲和性最高的适配子做了进一步的特异性的检验。结果:1.共80例病理标本中,有61例骨肉瘤组织中HER-2呈阳性表达,其阳性表达率为76.3%(61/80);其中不同性别、年龄阶段,肿瘤发生部位、肿瘤直径大小病理组织中HER-2的表达未见差异,无统计学意义(P0.05),而在患者TNM分期高和发生淋巴结转移的组织中HER-2表达显著,且差异具有统计学意义(P0.05)。2.经过12轮的筛选,得到了适配体9号与HER2蛋白具有极高亲和力,其从从初始的0.18上升至0.86,提高了约5倍。特异性结果显示:9号适配子具有针对性,只与HER2蛋白具有较高的特异性。结论:1.HER-2在骨肉瘤中表达异常,与骨肉瘤的发生发展有关,可作为骨肉瘤早期检测及评价预后的一个独立的生物学指标。2.经过多轮的筛选成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤预后的诊断和治疗奠定了坚实的基础。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R738.1

【参考文献】

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本文编号：1281892