siRNA抑制Cyclophilin A基因对喉鳞癌细胞Hep-2增殖、转移及顺铂敏感性的作用

发布时间：2017-12-14 08:12

  本文关键词：siRNA抑制Cyclophilin A基因对喉鳞癌细胞Hep-2增殖、转移及顺铂敏感性的作用

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【摘要】：目的:喉癌是常见的头颈部恶性肿瘤之一,其中喉鳞状细胞癌(Laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)是其最主要的病理学类型,约占99%。LSCC的发病率最近几年有所升高。因此探索对抗喉鳞癌转移的新策略及药物靶点是十分必要的。亲环素A(Cyclophilin A,CypA)是免疫抑制剂环孢素A(CyclosporinA,CsA)的细胞内结合蛋白。近来研究发现其在结肠癌、胰腺癌、肝癌等恶性肿瘤中高表达,并参与肿瘤的发生发展及生物学行为。前期研究发现CypA在喉癌组织中的表达较正常癌旁组织明显升高,但在喉癌中的生物学作用及机制尚不清楚。本实验利用RNA干扰技术沉默Hep-2细胞中Cyp A的表达,检测其对Hep-2细胞增殖、转移等方面的影响及其可能的分子机制。方法:将化学合成的靶向Cyp A的siRNA(small interfering RNA,小干扰RNA)转染喉鳞癌细胞Hep-2,同时以转染阴性对照NC siRNA和空白细胞作为对照,3组细胞分别命名为control组、NC siRNA组、CypA siRNA组。运用real-time PCR检测各组CypA及相关基因CD147、VEGF、MMP-9的mRNA表达差异;Western blot检测CypA、CD147、MMP-9的蛋白表达变化;ELISA方法测定Hep-2细胞培养上清液中VEGF蛋白含量的变化;MTT法检测CypA对细胞生长情况及顺铂敏感性的影响;平板克隆形成实验观察CypA在喉癌细胞增殖中的作用;流式细胞术检测CypA对细胞周期分布的影响;Transwell法检测Cyp A在喉癌细胞侵袭、迁移中的作用;血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)实验检测CypA对喉癌细胞血管通道形成能力的影响。结果:CypA siRNA转染后的Hep-2细胞中CypA mRNA和蛋白表达水平明显降低(P=0.000)。沉默CypA的表达可下调CD147(P=0.000)、VEGF(P=0.001)、MMP-9(P=0.000)的mRNA表达,同时可抑制Hep-2细胞VEGF的分泌和CD147、MMP-9蛋白的表达,差异均有统计学意义(P=0.000)。MTT结果显示Cyp A siRNA转染后的Hep-2细胞生长缓慢,且对顺铂敏感性明显增强(P=0.000);细胞克隆形成被抑制,control组克隆数为(235.00±23.90)、NC siRNA组为(240.67±10.07)、CypA siRNA组为(129.33±14.22)(P=0.000);细胞周期阻滞于G1期,各组增值指数分别为control组(0.337±0.016)、NC siRNA组(0.345±0.024)、CypA siRNA组(0.191±0.005)(P=0.000);Hep-2细胞的迁移、侵袭能力明显降低(P=0.000)。下调CypA表达后,Hep-2细胞VM表达降低,差异具有统计学意义(P=0.000)。结论:CypA表达下调抑制喉癌细胞株Hep-2的增殖、迁移侵袭能力及VM表达,增加喉癌细胞Hep-2对顺铂的敏感性,其机制可能与抑制CD147、VEGF、MMP-9的表达有关。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.65

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