HORMAD2在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响
本文关键词：HORMAD2在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响
【摘要】：目的：实验室前期工作已证实miR-133b在胃癌组织中下调,且初步验证了HORMAD2可能是miR-133b的靶基因。本课题探讨人胃癌组织及胃癌细胞系中HORMAD2的表达；研究下调HORMAD2对正常胃粘膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞株SGC-7901、AGS、MGC-803和BGC-823增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法：实时荧光定量PCR技术检测54对人胃癌组织及癌旁组织(距离病灶5cm之外的组织)中HORMAD2的表达水平。培养正常胃粘膜上皮细胞GES-1以及胃癌细胞株SGC-7901、AGS、MGC-803和BGC-823,通过实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(western blot)检测正常胃粘膜上皮细胞GES-1和分化程度不同的胃癌细胞中HORMAD2的相对表达水平。然后用针对HORMAD2合成的特异性的siRNA对细胞株GES-1和MGC-803、SGC-7901、BGC-823及AGS通过脂质体进行瞬时转染,并使用带有绿色荧光蛋白的siRNA检测脂质体转染细胞的有效性。转染48 h和72h后,分别在mRNA和蛋白水平通过实时荧光定量PCR及western blot检测转染后细胞株HORMAD2的表达情况。使用CCK-8检测下调HORMAD2对正常胃粘膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞株SGC-7901、 AGS、MGC-803和BGC-823增殖能力的影响。通过流式细胞术检测细胞通过siRNA转染48h后的细胞周期及细胞凋亡率。结果：实时荧光定量PCR得到HORMAD2在胃癌组织中的表达量高于癌旁组织(P0.05)；但HORMAD2的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度、浸润深度以及淋巴结转移并没有相关性(P0.05)。实时荧光定量PCR和western blot结果表明HORMAD2在未分化的胃癌细胞株MGC-803中的表达水平比正常胃粘膜上皮细胞GES-1和其他分化类型的胃癌细胞株(SGC-7901、AGS和BGC-823)明显增高(P0.05),而细胞株SGC-7901和AGS与GES-1相比HORMAD2的表达水平降低(P0.05)。siRNA转染胃癌细胞株和GES-1后,与对照组(siRNA_NC)相比,HORMAD2在mRNA和蛋白水平的表达明显下调(P0.05),转染有效。CCK-8检测到HORMAD2表达下调后正常胃粘膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞SGC-7901、AGS、MGC-803和BGC-823的增殖活性均受到抑制(P0.05)。而且,下调HORMAD2的表达后GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、 AGS、MGC-803和BGC-823的细胞凋亡率明显增高,这种效应尤其在高表达HORMAD2的MGC-803细胞中尤为明显；同时下调HORMAD2使得细胞周期阻滞在了S期,G2/M期停滞。结论：CT基因HORMAD2作为一种潜在的癌基因可能参与了胃癌的发生发展。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
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