MicroRNA-183在非小细胞肺癌中的表达及生物学功能研究

发布时间：2017-12-17 19:15

  本文关键词：MicroRNA-183在非小细胞肺癌中的表达及生物学功能研究

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【摘要】：目的:在全世界范围内,肺癌是发病率及死亡率均高的恶性肿瘤之一,是导致癌症致死的主要原因,其中非小细胞肺癌(non-smal1 cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌的80%。研究表明,MicroRNA(mi RNA)对肺癌的发生、发展发挥着极其重要的作用。在实验中首先对非小细胞肺癌组织标本与配对的癌旁正常组织标本利用实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测MicroRNA-183(miRNA-183)的表达水平;其次构建miR-183稳定过表达细胞株和抑制mi R-183表达细胞株,观察miR-183对非小细胞肺癌增殖、侵袭和迁移能力等生物学行为的影响,为肺癌的早期诊断,靶向治疗和改善预后提供了新的理论依据。方法:1、通过qRT-PCR技术测定miR-183在21例非小细胞肺癌组织与癌旁正常组织中的差异表达。2、构建miR-183慢病毒及阴性对照载体,分别转染A549细胞株,建立稳定过表达miR-183的细胞株A549/miR-183 mimics,抑制miR-183表达的稳定细胞株A549/miR-183 inhibitor以及阴性对照组A549/negative control,转染48h后在荧光显微镜下观察转染效率并利用q RT-PCR技术检测mi R-183的表达水平,验证转染细胞株是否成功建立。3、A549/mi R-183 mimics,549/miR-183inhibitor细胞株增值能力的观察:对转染后各组细胞株应用细胞增殖实验(CCK-8)来检测增值能力的变化情况。4、A549/miR-183 mimics,A549/miR-183 inhibitor细胞株迁移能力的观察:应用划痕实验对转染后各组细胞株的迁移能力进行检测。5、a549/mir-183mimics,a549/mir-183inhibitor细胞株侵袭能力的观察:应用transwell侵袭实验来检测转染后各组细胞株侵袭能力的变化情况。结果:1、相对于癌旁正常组织,mir-183在非小细胞肺癌组织中的表达水平呈显著上调(p0.05),证明mir-183在nsclc组织中明显升高;2、构建mir-183慢病毒载体,转染mir-183mimics48h后,qrt-pcr结果显示mir-183表达水平较对照组相比呈显著升高(18.23±0.68比1.0±0.29,p0.01),而转染mir-183inhibitor表达水平较对照组相比呈显著降低(0.06±0.01比1.0±0.29,p0.01),说明mir-183慢病毒过表达载体和抑制mir-183表达慢病毒载体构建成功,实验证明慢病毒转染有效;3、cck-8实验表明,与空白对照组和阴性对照组相比,转染mir-183mimics的肺癌a549细胞株增殖速度明显增强,而转染mir-183inhibitor的肺癌a549细胞株的增殖速度明显降低,证明过表达mir-183能增强a549细胞株增殖能力;4、划痕实验结果显示,mir-183mimics转染的a549细胞株迁移率明显大于对照组,证明mir-183mimics可增强a549细胞株的迁移能力;而mir-183inhibitor转染的a549细胞株迁移率明显小于对照组,证明mir-183inhibitor降低a549细胞株的迁移能力,证明过表达mir-183能增强a549细胞株迁移能力;5、transwell侵袭实验中,与空白对照组(55.72±3.326)和阴性对照组(47.64±3.571)相比,转染mir-183mimics后的a549细胞株24h后的侵袭穿膜的细胞数(154.29±4.735)明显升高(p0.01),而mir-183inhibitor的a549细胞株24h后的侵袭穿膜的细胞数(22.35±2.752)明显低于对照组(p0.01),证明过表达mir-183能增强a549细胞株侵袭能力。结论:1、mir-183在非小细胞肺癌组织中的表达水平与癌旁正常组织相比明显升高。2、成功建立稳定转染的细胞株A549/miR-183mimics,A549/mi R-183 inhibitor以及对照组A549/negative control。3、过表达miR-183能促进A549肺腺癌细胞株的增殖、侵袭和迁移的能力,证明miR-183能增强肺癌增殖、迁移及侵袭的功能,提示miR-183为肺癌的诊治提供了新的靶点,使其为肺癌的诊断治疗和预后监测提供了新的指导方向。
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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本文编号：1301253