HBV通过上调miR-331-3p的表达从而促进肝癌细胞的增殖

发布时间：2017-12-18 14:06

  本文关键词：HBV通过上调miR-331-3p的表达从而促进肝癌细胞的增殖

  更多相关文章： HCC HBV miR-331-3p VHL ING5

【摘要】：目的研究miR-331-3p在HBV相关肝癌发生发展中所起到的作用及其机制。方法1.通过基因芯片技术筛选在HepG2和HepG2.2.15细胞系中差异性表达的miRNA,用qRT-PCR的方法对差异表达的miRNA进行验证；选取在HepG2.2.15中表达稳定上升的miR-331-3p作为研究对象,在稳定和瞬时表达HBV的肝癌细胞系中检测HBV对miR-331-3p的作用。2.构建miR-331-3p启动子表达质粒,检测HBV对miR-331-3p启动子的作用,研究HBV调节miR-331-3p的机制。3.用MTS、平板克隆形成实验检测miR-331-3p对SMMC7721细胞增殖的影响。4.通过生物信息学网站寻找miR-331-3p的靶基因。通过构建靶基因3’-UTR表达质粒,检测miR-331-3p对靶基因3’-UTR活性的影响。用qRT-PCR和Western blot分别在mRNA水平和蛋白水平检测miR-331-3p对靶基因的作用。5.用qRT-PCR和Western blot检测HBV对靶基因的作用,并研究HBV、miR-331-3p和靶基因三者之间的关系。6.构建靶基因ING5真核表达质粒和稳定表达细胞系,MTS、平板克隆形成等实验检测靶基因对SMMC7721细胞增殖的影响。7.用裸鼠成瘤实验和免疫组化实验检测miR-331-3p和靶基因ING5对裸鼠体内肿瘤增殖的影响。8.用Western blot的方法检测伴随HBV感染的肝癌病人标本中靶基因ING5的表达量。结果1.MiR-331-3p在表达HBV的肝癌细胞系中表达上升。2.HBV通过上调miR-331-3p启动子从而上调其表达。3.MiR-331-3p能够促进SMMC7721增殖。4.MiR-331-3p能够通过结合VHL、ING53'-UTR从而抑制靶基因VHL、ING5的表达。VHL和ING5是miR-331-3p的靶基因。5.HBV能够抑制靶基因ING5的表达,并且其抑制作用是通过上调miR-331-3p的表达实现的。6.ING5能够抑制SMMC7721细胞增殖。7.MiR-331-3p促进裸鼠皮下肿瘤生长,ING5抑制肿瘤生长。8.伴随HBV感染的肝癌病人标本中ING5的表达量下降。结论HBV能够通过上调niR-331-3p进而抑制靶基因ING5的表达,影响HCC的发生和发展。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

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