细胞外基质蛋白SRPX2对HUVECs血管生成能力的影响

发布时间：2017-12-18 10:04

  本文关键词：细胞外基质蛋白SRPX2对HUVECs血管生成能力的影响

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【摘要】：目的评价不同来源的细胞外基质蛋白含sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成能力的影响。方法分别用重组pcDNA3.1-SRPX2及空载质粒转染HEK293T细胞和SW480细胞后收集条件培养基,作用于HUVECs;用pcDNA3.1-SRPX2及空载质粒直接转染HUVECs,各部分实验均分为转染组(添加pcDNA3.1-SRPX2质粒)、阴性对照组(添加pcDNA3.1质粒)和空白对照组(未添加质粒)三组。用Western blot检测SRPX2蛋白的表达情况。采用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力。分别用Transwell(共培养)迁移实验和划痕实验观察细胞的迁移能力。用Matrigel基质胶体外管腔形成实验观察HUVECs管腔形成能力。结果质粒转染HEK293T细胞和SW480细胞收集条件培养基作用于HUVECs 24、48、72h后,三组各时间点组间细胞增殖能力均无明显差异(p0.05);直接转染HUVECs,转染组24、48、72h各时间点细胞增殖能力较阴性对照组和空白对照组均明显增强(p0.05)。质粒转染HEK293T细胞收集条件培养基作用于HUVECs,转染组管腔样结构分支点数为(97±4)个/视野,明显多于阴性对照组(57±3)和空白对照组(54±3)个/视野(p0.05);质粒转染SW480细胞收集条件培养基作用于HUVECs,转染组管腔样结构分支点数为(86±5)个/视野,明显多于阴性对照组(52±3)和空白对照组(51±4)个/视野(p0.05);质粒直接转染HUVECs,转染组管腔样结构分支点数为(34±2)个/视野,明显多于阴性对照组(15±2)和空白对照组(13±2)个/视野(p0.05);添加通路抑制剂后SW480条件培养基管腔样结构分支点数空白对照组为(12±1)个/视野、阴性对照组为(11±2)个/视野、转染组为(26±3)个/视野、转染后添加uPAR抗体组为(11±2)个/视野、转染后添加FAK抑制剂组为(0)个/视野、转染后添加PI3K抑制剂组为(10±3)个/视野、转染后添加MAPK抑制剂组为(15±2)个/视野、转染后添加DMSO组为(23±1)个/视野,差异具有统计学意义(p0.05)。质粒转染HEK293T细胞收集条件培养基作用于HUVECs,转染组划痕6和12 h细胞迁移距离均明显大于阴性对照组和空白对照组,分别为(89.72±5.70)、(37.14±6.81)和(35.87±4.28)μm,(135.38±4.95)、(65.00±8.02)和(63.11±3.79)μm,(P0.05);质粒转染SW480细胞收集条件培养基作用于HUVECs,转染组划痕6和12h细胞迁移的距离均明显大于阴性对照组和空白对照组分别为(86.78±6.81)、(38.54±6.32)和(34.00±4.28)μm,(129.34±4.43)、(63.10±7.62)和(57.11±2.99)μm,(p0.05);质粒直接转染HUVECs,转染组划痕6和12 h细胞迁移距离均明显大于阴性对照组和空白对照组,分别为(108.32±8.41)、(69.97±9.23)和(64.87±7.34)μm,(155.87±5.34)、(121.19±8.03)和(118.89±5.24)μm(p0.05)。质粒转染HEK293T细胞,Transwell共培养迁移实验中,转染组16h迁移过膜细胞数为(549±10)个/视野,明显高于阴性对照组(334±11)和空白对照组(329±12)个/视野(p0.05);质粒转染SW480细胞,Transwell共培养迁移实验中,转染组16h迁移过膜细胞数为(512±12)个/视野,明显高于阴性对照组(318±11)和空白对照组(300±10)个/视野(P0.05);直接转染HUVECs迁移实验,转染组16h迁移过膜细胞数为(586±30)个/视野,明显高于阴性对照组(300±16)和空白对照组(290±21)个/视野(p0.05)。结论不同来源的SRPX2均可通过促进HUVECs的迁移及在Matrigel表面的管腔形成能力。提高内源性SRPX2的表达可促进HUVECs增殖能力,而来源于HEK293T细胞和SW480细胞的SRPX2对HUVECs增殖能力无明显影响。添加uPAR抗体、FAK、PI3K和MAPK通路抑制剂后,HUVECs的管腔形成能力明显减弱,提示SRPX2促进肿瘤血管生成可能与这些通路相关。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.5

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本文编号：1303740