不同HER-2水平的人乳腺癌MCF-7细胞内miRNAs表达谱及相关miRNAs对癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-12-18 21:11

  本文关键词：不同HER-2水平的人乳腺癌MCF-7细胞内miRNAs表达谱及相关miRNAs对癌细胞生物学行为的影响

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【摘要】：背景:表皮生长因子受体包含有多个不同类型的受体,含有膜酪氨酸激酶活性的人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)属于其中。当HER-2基因被激活,可导致细胞增生活跃和阻碍细胞的凋亡,这为肿瘤在乳腺癌中的发展提供主要的驱动力。一类内源性的、保守的、非编码的、蛋白单链小RNA(约含有22个核苷酸),称微小RNAs(Micro RNAs,mi RNAs)。mi RNAs主要通过肿瘤生物学如细胞增殖、分化、细胞凋亡和转移等方面调节细胞的发生发展。目前,mi RNAs既可作为癌基因又可作为抑癌基因参与细胞的调控。近些年有关HER-2和mi RNAs之间的报道日益增多,其中有些研究提示乳腺癌的发生发展与HER-2的过表达和mi RNAs的失调相关联。因此关于探究mi RNAs和HER-2之间的联系极为重要。目的:通过对比观察人乳腺癌MCF-7细胞和MCF-7稳定转染HER-2(MCF-7/HER-2)细胞中mi RNAs的表达差异,初步筛选出与HER-2表达相关的mi RNAs表达谱,为mi RNAs通过参与HER-2信号通路从而参与调控乳腺癌细胞生物学行为的机制提供研究基础。方法:(1)本研究采用mi RNAs芯片技术,培养人乳腺癌MCF-7细胞和MCF-7/HER-2细胞,检测两株细胞内mi RNAs的表达,以MCF-7细胞为基准,筛选出与HER-2表达相关且差异大于两倍的mi RNAs。(2)选取MCF-7/HER-2细胞较MCF-7细胞上调的hsa-mi R-181a-5p和下调的hsa-mi R-877-3p为对象,采取实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)验证其在MCF-7细胞和MCF-7/HER-2细胞中的表达量。(3)选取MCF-7/HER-2细胞,分别转染hsa-mi R-181a-5p阻遏物(mi R-181a-5p ASO)和hsa-mi R-877-3p模拟物(mi R-877-3p mimic),通过细胞划痕实验,MTT实验和Transwell侵袭迁移实验检测细胞功能学的改变。(4)运用生物信息学方法对这两个mi RNAs可能的靶基因进行预测。结果:(1)利用mi RNAs微阵列,筛选获得217个与HER-2相关的mi RNAs,其中MCF-7/HER-2细胞较MCF-7细胞上调的mi RNAs有123个,下调的mi RNAs有94个。(2)q RT-PCR结果显示,MCF-7/HER-2细胞与MCF-7细胞相比,hsa-mi R-181a-5p的表达显著上调,hsa-mi R-877-3p的表达显著下调(P0.01)。(3)hsa-mi R-181a-5p对HER-2阳性乳腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移的活性有促进作用,hsa-mi R-877-3p对HER-2阳性乳腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移的活性有抑制作用。结论:(1)MCF-7细胞和MCF-7/HER-2细胞mi RNAs的表达有差异。(2)hsa-mi R-181a-5p的表达在MCF-7/HER-2细胞中较MCF-7细胞表达显著上调。在HER-2阳性的乳腺癌细胞中hsa-mi R-181a-5p可促进细胞的增殖、侵袭和迁移。(3)hsa-mi R-877-3p的表达在人乳腺癌细胞MCF-7/HER-2中较MCF-7表达显著下调。在HER-2阳性的乳腺癌细胞中hsa-mi R-877-3p可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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1 王艳;吴强;胡向阳;吴正升;黄金;;不同侵袭力乳腺癌细胞miRNAs表达谱检测[J];安徽医科大学学报;2010年03期

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本文编号：1305629