Neuropilin-1在胃癌细胞系AGS中的表达与作用

发布时间：2017-12-22 10:12

  本文关键词：Neuropilin-1在胃癌细胞系AGS中的表达与作用　出处：《华北理工大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的通过脂质体Lip-2000转染神经纤毛蛋白-1(NRP-1)的干扰RNA(siRNA),使人胃腺癌细胞株AGS中神经纤毛蛋白-1的mRNA沉默,进而观察NRP-1对胃癌细胞株一系列生物学行为的影响,为研究一种以NRP-1为靶点的新型靶向药物治疗胃癌提供必要的理论依据。方法常规培养胃癌细胞株AGS,严格按照siRNA的使用说明进行操作,首先通过脂质体Lip-2000转染NRP-1的荧光干扰RNA至AGS细胞株中,48小时后在荧光显微镜下观察AGS细胞株的转染效率,转染效率达60%以上即可认为转染成功;通过脂质体Lip-2000将不同的物质转染至胃癌细胞株AGS中,将胃癌细胞株分为三个不同组别,即转染组(转染siRNA)、无意义序列组(转染siRNA的无意义序列)和空白对照组(转染缓冲剂PBS)。首先绘制细胞生长曲线,通过实时荧光定量PCR分别检测三组中NRP-1的mRNA的相对表达量;免疫细胞化学法分别检测三组细胞中ki-67蛋白的表达情况;MTT分别测定三组的增殖情况;流式细胞仪分别测定三组的细胞周期;Transwell小室实验分别检测三组的侵袭和迁徙能力。结果1 RT-PCR结果显示:将NRP1-siRNA转染入AGS细胞后(通过脂质体),转染组NRP-1 mRNA表达水平较对照组显著下调,差异具有统计学意义(P0.05)。2根据免疫细胞化学染色结果进行判定,转染NRP1-si RNA组的胃癌AGS细胞组与对照组比较,ki-67蛋白的相对表达量显著下调,差异具有统计学意义(P0.05)。3 MTT法显示:转染组的胃癌AGS细胞增殖能力较对照组显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。4流式细胞术检测结果显示:转染组胃癌AGS细胞生长周期出现抑制,停滞在Gl期,较对照组显著增加,差异具有统计学意义(P0.05)。5小室迁徙实验表明:转染组的胃癌AGS细胞迁徙能力显著下降,与对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。6小室侵袭实验表明:转染组的胃癌AGS细胞侵袭能力显著下降,与对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论1应用RNAi技术,设计并合成针对NRP-1的si RNA,转染后能有效的下调AGS细胞NRP-1 mRNA的表达。2胃癌AGS细胞经NRP1-siRNA转染后,ki-67蛋白的表达量显著下降,细胞增殖能力明显下降,细胞停滞于G1期。3胃癌AGS细胞经NRP1-siRNA转染后,细胞的迁徙、侵袭能力显著下降,恶性生物学行为受到抑制。4 NRP-1在胃癌细胞中影响细胞的一系列生物学行为,为NRP-1成为新的胃癌治疗靶点提供理论基础,具有潜在的临床应用前景。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2

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本文编号：1319216