组蛋白去乙酰化酶HDAC9在胶质瘤细胞增殖中的作用及机制研究

发布时间：2017-12-24 10:30

本文关键词：组蛋白去乙酰化酶HDAC9在胶质瘤细胞增殖中的作用及机制研究　出处：《西南大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：本文旨在研究组蛋白去乙酰化酶HDAC9对胶质瘤细胞增殖的影响。组蛋白去乙酰化酶HDAC9是组蛋白去乙酰化酶Ⅱ家族的一员,其含有去乙酰化酶活性结构域,锌脂结构域,MEF2结构域,丝氨酸结合位点及核定位信号。HDAC9可以催化组蛋白H3K16ac的去乙酰化及其他非组蛋白的去乙酰化。近年来发现HDAC9在多种肿瘤中行使不同的功能,其大致可以分为抑癌和致癌两个方面,具体则由肿瘤细胞的遗传背景决定的。肿瘤细胞的恶性增殖往往和细胞周期进程的改变密切相关,EGFR信号通路在细胞周期的调控中发挥重要作用。EGFR一经激活,其下游的PI3K/AKT和Ras-ERK通路随即被激活,进而加速细胞周期进程。转录共激活因子TAZ近年来被发现和多种肿瘤的发生发展密切相关。TAZ可以促进细胞周期、促进迁移和抑制细胞凋亡。研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以抑制TAZ的表达进而抑制细胞增殖。但是HDAC9与TAZ之间的联系尚未有报道。我们采用qRT-PCR和和Western blot技术检测HDAC9在不同胶质瘤细胞,利用慢病毒介导的shRNA干扰技术在细胞系U87和LN229中对HDAC9蛋白的表达进行下调,利用MTT, BrdU标记技术检测细胞增殖情况,建立荷瘤小鼠模型检测HDAC9在个体水平对胶质瘤细胞增殖的影响,利用流式细胞仪检测HDAC9对细胞周期的调控,采用Western blot技术检测信号通路EGFR/AKT/ERK的变化情况,利用免疫共沉淀技术检测HDAC9与TAZ的相互作用情况,最后通过在HDAC9干扰细胞中过表达TAZ,检测TAZ对HDAC9干扰引起的细胞增殖变化的恢复作用。本文初步研究了HDAC9在胶质瘤细胞增殖中的作用及其可能的机制研究。实验结果表明HDAC9蛋白在胶质瘤细胞系U87、LN229、A172及原代恶性胶质瘤细胞T0807和T1018均有显著的表达。在U87和LN229细胞系中,利用慢病毒介导的shRNA干扰对HDAC9蛋白的表达进行下调,细胞增殖实验发现细胞增殖受到明显抑制,同时流流式细胞仪检测细胞周期阻滞在G1期,并伴随有相关周期蛋白cyclin E和CDK2表达的下调,相关的EGFR信号通路受到抑制,免疫共沉淀结果表明HDAC9可以和TAZ相互结合,同时HDAC9干扰下调了TAZ的表达。进一步的实验表明,过表达TAZ可以阻断由HDAC9干扰引起的相关效应,从而初步确定了HDAC9促进细胞增殖是通过TAZ介导的EGFR信号通路的激活调节的。
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41

【共引文献】