β-catenin在不同骨肉瘤细胞中的表达及其对TE85细胞迁移、侵袭及成骨分化的影响

发布时间：2017-12-24 21:14

  本文关键词：β-catenin在不同骨肉瘤细胞中的表达及其对TE85细胞迁移、侵袭及成骨分化的影响　出处：《重庆医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的检测Wnt/β-catenin信号通路中关键因子β-catenin在不同骨肉瘤细胞143B、MG63、TE85中的表达情况,并以TE85细胞为目的细胞进行研究,检测过表达β-catenin对TE85细胞迁移、侵袭和成骨分化的影响。方法(1). RT-PCR、Western Blot分别检测不同骨肉瘤143B、MG63、 TE85田胞中β-catenin mRNA及蛋白的表达情况；(2).通过重组腺病毒(Adβ-catenin)介导的方法在骨肉瘤TE85细胞中过表达β-catenin,划痕实验和Transwell实验分别检测过表达β-catenin对TE85细胞迁移和侵袭的影响；(3).通过重组腺病毒(Adβ-catenin和AdBMP9)介导的方法在骨肉瘤TE85细胞中单独和联合过表达β-catenin及BMP9, RT-PCR检测TE85细胞P-catenin及BMP9 mRNA的表达情况,荧光素酶报告基因系统检测β-catenin的转录活性。(4).TE85细胞经Adβ-catenin和AdBMP9诱导后,通过RT-PCR检测骨钙蛋白(Osteocalcin, OC)和骨桥蛋白(Osteopontin, OPN)以及骨保护素(Osteoprotegerin, OPG)基因mRNA的表达,并利用Western Blot检测OC及OPN的蛋白表达水平；碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性变化检测早期成骨指标,茜素红染色检测晚期成骨指标钙盐沉积情况。结果(1).上述3种细胞中,TE85细胞β-catenin mRNA及蛋白的表达相对较低；(2).感染Adβ-catenin的TE85细胞迁移率和侵袭能力明显低于对照组(P0.05)；(3). Adβ-catenin与AdBMP9能显著增加TE85细胞外源性表达β-catenin与BMP9(P0.05), Adβ-catenin能明显增强β-catenin/Tcf4的相对活性(P0.05)；(4). Adβ-catenin与AdBMP9单独诱导TE85细胞ALP活性增加程度有限,对OPG mRNA及OC、OPN的mRNA和蛋白表达以及钙盐沉积无明显作用,而联合诱导后上述早、晚期各项相关成骨指标与对照组比较均显著增强(P0.05)。结论β-catenin在TE85细胞中的内源性表达相对较低,过表达β-catenin能抑制TE85细胞的迁移、侵袭能力,过表达β-catenin不能单独诱导TE85细胞成骨分化,而联合BMP9诱导后,成骨分化作用明显增强。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R738

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