启膈散增加食管癌EC9706细胞对顺铂敏感性机制研究
本文关键词：启膈散增加食管癌EC9706细胞对顺铂敏感性机制研究 出处：《河南中医药大学》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：目的通过研究启膈散含药血清联合顺铂对人食管癌细胞EC9706的增殖、凋亡、周期及相关基因miR-21 PDCD4 PTEN及蛋白表达的调控作用,初步探讨启膈散增加人食管癌EC9706细胞对顺铂敏感性机制,为临床应用提供理论依据。方法制备启膈散含药血清,用不同浓度的含药血清与同浓度的顺铂联合作用于EC9706细胞48h,用MTT法筛选出最有效的含药血清浓度(5%含药血清)。分别用5%含药血清与顺铂、5%对照血清与顺铂、5%含药血清、5%对照血清作用于EC9706细胞,应用流式细胞仪检测其对EC9706细胞凋亡、周期的影响;应用PCR检测相关基因miR-21、PDCD4、PTEN表达情况;应用Western-blot法检测相关蛋白PDCD4、PTEN表达水平。结果1.10%、5%、2.5%含药血清与顺铂联合应用时都有协同作用,其中5%含药血清与顺铂协同增效作用最为显著。2.EC9706细胞经不同浓度药物作用48h后,与对照组相比较,除5%含药血清组外(P0.05),顺铂低浓度、高浓度组、含药血清联合高浓度顺铂、含药血清联合低浓度顺铂组,细胞凋亡率均升高,有统计学意义(P0.05);与单独5%含药血清组比较,联合低浓度顺铂组与高浓度顺铂组细胞的凋亡率也有升高(P0.05),分别于同浓度的顺铂组比较,含药血清联合低浓度顺铂组凋亡率升高(P0.05),联合高浓度组没有差异(P0.05)。3.EC9706细胞经不同浓度药物作用48h后,与对照血清比较,加入顺铂后S期的细胞比例均增加(P0.05),其中0.5μg/ml顺铂组升高最为显著。含药血清联合高浓度顺铂比单独使用同浓度顺铂S期比例增加,G2期降低(P0.05),有统计学意义;含药血清联合低浓度顺铂与单独使用同浓度顺铂相比无统计学差异(P0.05)。4.与5%对照血清组比较,其余各组miR-21相对定量都有升高(P0.05);无论高浓度顺铂组还是低浓度顺铂组,联合含药血清后,miR-21相对定量均比单用下降(P0.05)。表-5结果示:与5%对照血清组相比,除5%含药血清PDCD4表达量下降外,其余各组表达量升高(P0.05);低浓度顺铂联合血清组比其单独使用PDCD4表达量升高(P0.05),高浓度顺铂联合血清组比其单独使用PDCD4表达量则下降(P0.05);与5%对照血清组相比,0.5μg/ml顺铂组与5%含药血清组PTEN表达量降低,其余组均升高(P0.05),顺铂联合血清两组均比单独顺铂两组PTEN表达量高(P0.05)。5.与对照组相比,各组PDCD4蛋白表达量升高P0.05;高浓度顺铂联合含药血清组比单用高顺铂组PDCD4蛋白表达量升高(P0.05),低浓度顺铂的两组变化不明显(P0.05);两个浓度顺铂联合含药血清时PTEN的表达量均高于单独使用顺铂(P0.05)。结论1.启膈散联合顺铂应用对人食管癌细胞株EC9706抑制有协同作用。2.启膈散能过提高顺铂诱导人食管癌细胞株EC9706凋亡的作用和S期的阻滞率。3.启膈散联合顺铂可以下调miR-21表达,上调靶基因PDCD4mRNA与PTEN mRNA及其蛋白的表达。启膈散能够增加EC9706对顺铂的敏感性,而且这一机制可能是通过miR-21与其介导调控的其下游的靶基因PDCD4mRNA与PTEN共同参与完成的。
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1
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，本文编号：1337047
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