缺氧在结直肠癌VM形成中的作用及相关机制的研究
本文关键词：缺氧在结直肠癌VM形成中的作用及相关机制的研究 出处：《天津医科大学》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：研究目的本课题主要研究缺氧在结直肠癌VM形成中的作用及相关机制,首先通过体内实验检测缺氧诱导因子-lα(HIF-lα)在结直肠癌和结直肠腺瘤中的表达情况,其次检测结直肠癌和结直肠腺瘤中VM存在情况,分析HIF-lα表达与病理资料的关系及其对临床预后的影响;再通过检测HIF-lα与EMT及VM相关蛋白的相关性,探讨HIF-lα在结直肠癌VM形成中的作用;最后通过体外模拟缺氧微环境,探讨缺氧对结直肠癌细胞VM形成的影响及可能的分子机制。研究方法(1)对收集的50例结直肠癌及50例结直肠腺瘤患者组织标本进行HIF-lα、VEGF、FLK-1、VE-cad、MMP-2、E-cadherin、Vimentin、Snail免疫组织化学染色及CD31/PAS双重染色,检测这些指标的表达变化。(2)分析结直肠癌中HIF-lα、MVD的表达与临床预后的关系及HIF-lα的表达与VEGF、VE-cad、FLK-1、MMP-2、E-cadherin、Vimentin、Snail的相关性。(3)体外模拟缺氧微环境,检测与常氧状态相比,缺氧对结直肠癌HCT116和HT-29细胞侵袭、迁移和成管状态的改变。(4)通过WB及RT-PCR实验,检测与常氧状态相比,缺氧对EMT标志分子(E-cadherin、Vimentin)在蛋白及mRNA水平表达的改变。(5)通过WB实验检测缺氧诱导的VE-cad、MMP-2、Snail表达情况。研究结果(1)HIF-1α阳性表达在结直肠癌中显著较腺瘤中高,且通过CD31/PAS双重染色发现:VM存在于缺氧程度严重的结直肠癌组织中,而腺瘤中无VM存在。(2)HIF-lα的表达与患者临床病理资料的关系HIF-lα的表达在年龄"f50岁或50岁的患者,男性和女性患者,肿瘤"f5cm或5cm患者,TNM分期Ⅰ/Ⅱ期和Ⅲ/Ⅳ期患者中未见差别,差异无统计学意义,HIF-lα在低分化肿瘤和中分化肿瘤中的表达明显多于高分化肿瘤中的表达,差异有统计学意义(P=0.04)。HIF-lα在有转移组患者中的表达明显高于无转移组患者中的表达,差异有统计学意义(P=0.009)。生存分析结果显示,与HIF-lα阴性患者相比,HIF-lα阳性患者存活时间显著缩短。(3)结直肠癌中MVD值明显高于结直肠腺瘤中MVD值,且差异具有统计学意义,并对结直肠癌中MVD≤20的患者与MVD20的患者进行生存分析比较,发现MVD≤20的患者生存时间比MVD20患者的长,MVD与患者生存时间呈负相关。(4)结直肠癌中HIF-lα的表达与VEGF、VE-cad、FLK-1、MMP-2的相关性HIF-lα与VEGF表达正性相关(r=0.346,P=0.014);HIF-lα与FLK-1表达正性相关(r=0.338,P=0.016);HIF-lα与VE-cad表达正性相关(r=0.406,P=0.003);HIF-lα与MMP-2表达正性相关(r=0.529,P=0.000)。(5)HIF-lα的表达与E-cadherin、Vimentin、Snail的相关性HIF-lα阳性表达与Snail的阳性表达呈正相关(r=0.371,P=0.004)。在50例结直肠癌中有32例呈HIF-lα阳性表达,且在这32例HIF-lα阳性中有10例Vimentin阳性表达(r=0.276,P=0.026),这10例均为E-cadherin阴性表达,这表明HIF-lα的表达与EMT的发生呈正相关。(6)通过体外构建缺氧模型,观察缺氧对结直肠癌HCT116和HT-29细胞功能学影响,结果显示:与常氧组相比,缺氧组中这两种细胞的侵袭、迁移和成管能力都增强。(7)WB结果表明:与常氧组相比,缺氧组E-cadherin蛋白表达显著减少,HIF-1α、Vimentin、Snail、VE-cad、MMP-2蛋白表达都明显增多。(8)RT-PCR结果表明,与常氧组相比,缺氧组E-cadherin mRNA表达显著减少,HIF-1α、Vimentin mRNA表达水平增加。研究结论:(1)HIF-1α在结直肠癌中呈高表达,且与患者不良预后有关。(2)VM存在于缺氧程度严重的结直肠癌组织中,而腺瘤中无VM存在。(3)缺氧诱导结直肠癌HCT116、HT-29细胞的侵袭迁移及成管能力均增强。(4)缺氧诱导EMT的发生,并调控VM相关蛋白(VE-cad、MMP-2)的高表达,进一步促进VM的形成。
[Abstract]:The expression of HIF - 1伪 , VEGF , FLK - 1 , VE - cad , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin were detected in 50 colorectal cancer patients and 50 patients with colorectal adenoma . ( 2 ) The expression of HIF - 1伪 in colorectal cancer was significantly higher than that in patients without metastasis ( r = 0.346 , P = 0 . 016 ) . ( 5 ) The expression of HIF - 1伪was positively correlated with the positive expression of E - cadherin , vimentin , and snail ( r = 0.371 , P = 0.004 ) . The expression of HIF - 1伪 and Vimentin was significantly decreased in the hypoxia group compared with the normal oxygen group . ( 4 ) Hypoxia - induced EMT occurred and the high expression of VM - related protein ( VE - cad , MMP - 2 ) was regulated and the formation of VM was further promoted .
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.34
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，本文编号：1434912
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