RNA解螺旋酶DDX5的表达与调控对肝内胆管癌生物学特性的影响及其临床病理学意义的研究

发布时间：2018-01-25 23:51

  本文关键词： RNA解螺旋酶DDX5 肝内胆管癌 预后 上皮-间质转化 恶性肿瘤　出处：《第二军医大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一章DDX5的表达调控对ICC生物学特性的影响及其可能机制目的:探讨下调DDX5对肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)RBE细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法:DDX5-h RNA慢病毒转染ICC细胞株RBE,利用Western Blot实验检测慢病毒转染后RBE细胞中DDX5蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪和Alamar Blue法检测DDX5表达下调后对RBE细胞周期及增殖的影响。此外,采用划痕实验及Transwell侵袭实验检测DDX5对RBE细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western Blot实验检测DDX5表达下调后EMT相关分子的表达变化。结果:Western Blot法检测结果显示,DDX5-sh RNA组中RBE细胞中DDX5蛋白的表达水平较空白对照组及阴性对照组显著降低,提示DDX5-sh RNA转染能有效抑制RBE细胞中DDX5蛋白的表达。Alamar Blue实验检测结果显示,DDX5-sh RNA组在48小时所检测得到的细胞增值率均明显低于空白对照组及阴性对照组(P值均0.05);划痕愈合实验显示,24小时后,DDX5-sh RNA组RBE细胞的迁移率明显低于空白对照组和阴性对照组(P值均0.01);Transwell侵袭实验结果显示,DDX5-sh RNA组平均穿过膜的细胞数较空白对照组和阴性对照组明显减少,差异具有显著性(P值均0.01)。流式细胞实验显示,DDX5-sh RNA1组和2组S期细胞所占百分比明显高于空白对照组和阴性对照组,与之对应的G0/G1、G2/M期比例相应降低,细胞阻滞在S期(P值均0.05)。Western Blot法研究结果显示,EMT分子vimentin、SNAIL及EGFR水平在DDX5-sh RNA细胞中的表达水平不同程度下降。结论:DDX5表达下调能抑制ICC RBE细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并阻滞细胞生长周期于S期;DDX5可以通过EMT机制影响ICC的生物学特性。第二章DDX5在ICC免疫病理学诊断和临床预后评估中的意义目的:检测ICC组织中DDX5的表达情况,验证DDX5在ICC的诊断及鉴别诊断中的价值,并探讨DDX5的表达水平与ICC临床病理参数及预后之间的相关性。方法:收集2000年7月至2006年3月间我院手术切除并病理诊断为ICC的病例323例。通过查阅电子和纸质版病例档案,收集患者的年龄、性别、肿瘤大小、数目、有无肝硬化、有无微血管癌栓、TNM分期等病理资料。另取癌旁正常组织作为对照。将统计完整的病例录入Microsoft Excel并建立数据库,以此数据库为基础,利用SPSS 19.0分析比较DDX5的表达水平与ICC临床病理参数之间的相关性,并对323例ICC预后进行评估。结果:DDX5阳性染色呈棕褐色或棕黄色,主要表达于癌细胞核及细胞质。323例ICC组织中170例DDX5表达阳性,阳性率为52.6%。DDX5在ICC组织中的表达水平明显高于正常胆管组织,统计结果有显著差异(P0.05)。对4类病变进行免疫组化分析,结果显示,高级别上皮内瘤变组织中DDX5的阳性率为40%(4/10),假腺管型肝细胞癌组织中DDX5的阳性率为0%(0/10),肝内转移性腺癌组织中DDX5的阳性率为50%(5/10)。ICC组织中DDX5的表达量与患者性别、血清ALP值有关(P0.05),但与患者的年龄、肝硬化情况、肿瘤大小、TNM分期等无关(P0.05)。DDX5高表达组的总生存期(overall suvival,OS)明显差于低表达组(P=0.011),但与复发时间(time to recurrence,TTR)无关(P=0.555)。结论:DDX5作为ICC的一个新型肿瘤标志物,在ICC的诊断与鉴别诊断,以及评估ICC患者术后生存状况具有较大的实际应用价值。
[Abstract]:Effect of expression and regulation of chapter DDX5 of ICC biological characteristics and its possible mechanism Objective: To investigate the effect of down-regulation of DDX5 in intrahepatic cholangiocarcinoma (intrahepatic, cholangiocarcinoma, ICC) RBE cell proliferation, migration, invasion and influence of cell cycle and its possible molecular mechanism. Methods: DDX5-h RNA lentivirus transfected ICC cell line RBE. The use of DDX5 cells RBE protein expression of Western was detected by Blot assay after lentivirus transfection, expression on cell cycle of RBE cells and down regulate the proliferation by flow cytometry and Alamar Blue assay for detection of DDX5. In addition, the effect of wound healing assay and Transwell invasion assay of DDX5 on invasion and migration of RBE cells. The expression by Western Blot assay after the down-regulation of DDX5 expression of EMT related molecules. Results: the testing results of Western Blot showed that DDX5 cells RBE protein DDX5-sh in the RNA group The expression level was higher than that of blank control group and negative control group decreased significantly, suggesting that the expression of.Alamar Blue assay results DDX5-sh RNA transfection can effectively inhibit DDX5 protein in RBE cells showed that the DDX5-sh RNA group detected cell proliferation rate was significantly lower than that in blank control group and negative control group in 48 hours (P 0.05) wound healing; experimental results show that after 24 hours, the migration of DDX5-sh RBE cells in RNA group was significantly lower than the blank control group and negative control group (P < 0.01); Transwell invasion assay showed that the number of cells in DDX5-sh RNA group the average across the membrane compared with blank control group and negative control group were significantly reduced, the difference was significant (P < 0.01). Flow cytometry, DDX5-sh RNA1 group and the 2 group of S phase cell percentage was significantly higher than the blank control group and negative control group, and the corresponding G0/G1, G2/M ratio decreased, fine The cell block in S phase (P 0.05) the research results of.Western Blot showed that the EMT molecule vimentin, the expression level of SNAIL and EGFR in the level of DDX5-sh in RNA cells decreased. Conclusion: downregulation of DDX5 can inhibit ICC RBE cell proliferation, migration and invasion, and blocking the cell cycle in S period; DDX5 through the biological characteristics of EMT ICC mechanism. In the second chapter, the DDX5 diagnosis and clinical prognostic significance of ICC in immune pathology Objective: to detect expression of DDX5 ICC in the organization, verification of DDX5 in the diagnosis and differential diagnosis of ICC in value, and to explore the correlation between the expression of DDX5 and ICC the clinicopathological parameters and prognosis. Methods: from July 2000 to March 2006 in our hospital surgical resection and pathological diagnosis of ICC 323 cases. Through access to electronic and paper version of the case file, collect the patient's age, gender, tumor The size, number, there is no cirrhosis, without microvascular invasion, TNM staging and pathologic data. Another normal tissues as control. The statistics of cases with complete input Microsoft Excel and the establishment of a database, the database as the foundation, the correlation between the expression level of comparative analysis using SPSS 19 DDX5 with clinicopathological parameters of ICC, and to evaluate the prognosis of ICC. Results: 323 cases of DDX5 positive staining was brown or yellow brown, mainly expressed in the expression of DDX5 in 170 cases of cancer cell nucleus and cytoplasm of.323 cases of ICC tissues, the positive rate of 52.6%.DDX5 expression in ICC tissues was significantly higher than that in normal bile duct tissues. Statistical results there were significant differences (P0.05). Analysis of 4 types of lesions were immunohistochemistry showed that the positive rate of DDX5 high grade intraepithelial neoplasia tissues were 40% (4/10), false positive rate of glandular type DDX5 in hepatocellular carcinoma was 0% (0/10), The positive rate of DDX5 in liver metastatic adenocarcinoma tissues were 50% (5/10) expression and gender DDX5.ICC tissues, serum ALP value (P0.05), but with the age of patients, liver cirrhosis, tumor size, TNM stage was not significant (P0.05).DDX5 high expression group (total deposit overall suvival, OS) is significantly worse than the low expression group (P=0.011), but with time to recurrence (time to recurrence, TTR) to (P=0.555). Conclusion: DDX5 as a new tumor marker of ICC, in the diagnosis and differential diagnosis of ICC, ICC and evaluate the postoperative survival situation has great practical application value.

【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.8

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本文编号：1464048