RhoGDI2基因对膀胱癌临床病理因素和预后的影响及其调控通路的研究

发布时间：2018-01-28 10:49

  本文关键词： RhoGDI2 膀胱癌 信号通路 生物信息学　出处：《广西医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:分析RhoGDI2基因对膀胱癌转移、预后的影响,探索研究其参与调控的下游通路。方法:1.制作膀胱癌组织芯片,免疫组织化学法检测组织芯片中RhoGDI2蛋白表达情况,分析其与膀胱癌病理、预后的相关性。2.从美国癌组基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载膀胱癌全基因组表达谱数据集合及患者临床信息资料,分析RhoGDI2基因的表达与膀胱癌患者临床病理、预后的相关性,再运用TCGA数据库膀胱癌全基因表达谱及DAVID(The Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery,DAVID)在线工具富集RhoGDI2相关下游信号通路。3.利用慢病毒转染技术构建立RhoGDI2正负表达细胞系,Western blotting验证所富集RhoGDI2下游通路可能性。4.Western blotting验证临床18例膀胱癌组织中RhoGDI2表达与富集信号通路的节点蛋白相关性。总共检测相关指标有16个:RhoGDI2、Cdc42、Rac123、Phosphor-Rac1/cdc42(ser71)、RhoA、Rho B、RhoC、Raf1、Ras、Rock2、MEK1/2、Erk1、Vav2、Vav3、MLC2、P-MLC2(s19)。结果:1.膀胱癌组织芯片分析结果:AJCC pTNM分期中T2~T3分期、T1-2~T3-4期、病理分级、转移与RhoGDI2的表达存在显著负相关(P0.05),预后则与RhoGDI2的表达存在显著正相关(RhoGDI2高表达组中位生存时间5年生存率均明显长于/高于低表达组,P0.05)。2.tcga数据分析结果:rhogdi2的表达在ajccptnm分期的t2-t3期、临床分期的ii~iii期与分期呈负相关,在t3~t4期与分期显著正相关(p0.05),与病理分级呈明显负相关(p0.05),与肌层侵润、转移无明显相关(p0.05)。预后则与rhogdi2的表达存在显著正相关(rhogdi2高表达组中位生存时间、中位无瘤生存时间、3年生存率、5年生存率、3年无瘤生存率、5年无瘤生存率均明显长于/高于低表达组,p0.05)。从tcga数据库膀胱癌全基因表达谱中筛查出与rhogdi2相关差异表达基因5960个。纳入david在线工具后富集出与rhogdi2相关信号通路共105条,其中涉及cdc42、rhoa、rac的有9条,其所含基因与rhogdi2的表达正向相关。另外,涉及ras基因的通路有18条,其所含基因与rhogdi2基因的表达存在负向关系。3.体外细胞westernblotting验证rhogdi2调控通路,rhogdi2、cdc42、rac123、rhoa、ras、mlc2在t24-rhogdi2细胞中显著高于对照组,而在t24-rhogdi2-rnai中明显低于对照组(p0.05)。rock2、erk1、vav2、vav3仅在t24-rhogdi2-rnai细胞系中表达显著降低(p0.05),mek1/2、p-mlc2则仅在t24-rhogdi2组中明显降低(p0.05)。rhoc在t24-rhogdi2-rnai和t24-rhogdi2中表达都显著高于对照组(p0.05),phosphor-rac1/cdc42(ser71)、rhob、raf1则在5种细胞系中无明显表达。4.膀胱癌组织标本westernblotting验证rhogdi2调控通路:(1)癌组中,cdc42、rac123、rhoa、ras、erk1、vav2、mlc2和rhogdi2的表达在spearmon相关分析中都呈显著正相关(p0.05),而mek1/2、p-mlc2的表达情况则与上述指标相反,rock2与rhogdi2不存在明显相关性(p0.05)。(2)正常组中各相关指标在rhogdi2高低表达组间也无明显差异(p0.05)。(3)rhogdi2、rhoa在癌组的表达显著低于正常组(p0.05),rock2、ras、mek1/2、Erk1、Vav2、MLC2、P-MlC2则是癌组的表达明显上调(P0.05)。Rac123、Cdc42在癌组和正常组中表达无明显差异(P0.05)。(4)RhoGDI2低表达组中癌组RhoGDI2、Cdc42、Rac123、RhoA的表达明显低于正常组(P0.05),而MEK1/2则明显高于(P0.05)。RhoGDI2高表达组中癌组Cdc42、Ras的表达相对于正常组表达明显上调(P0.05),在癌组中Rock2、Erk1、Vav2、MLC2、P-MLC2无论在RhOGDI2高表达还是低表达组均相对于正常组表达上调(P0.05)。结论:1.RhoGDI2是膀胱癌病理分期、临床分期、病理分级、转移及预后的相关因素。2.Rho GDI2基因可通过调节RhoGTP酶间接对其下游信号通路:Vav-RhoA-ROCK-MLC和Ras-MEK-Erk起到主要的调节作用,最终发挥抑制膀胱癌发展及改善预后的生物学效应,所以该基因及其下游通路或可成为膀胱癌靶向治疗的新型靶向位点。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of RhoGDI2 gene on the metastasis and prognosis of bladder cancer . The results showed that the expression of rhogdi2 was significantly correlated with stage ( P < 0.05 ) . The results showed that the expression of rhogdi2 was significantly correlated with stage ( P < 0.05 ) . The survival time , survival time , 3 - year survival rate , 5 - year survival rate , 3 - year tumor - free survival rate and 5 - year tumor - free survival rate of rhogdi2 were significantly longer than that of low - expression group ( p < 0.05 ) . 3 . The expression of rhogdi2 , cdc42 , rac123 , rhoa , ras and mlc2 was significantly lower in t24 - rhogdi2 - rnai than in the control group ( p . 05 ) . ( 4 ) The expression of RhoGDI2 , Cdc42 , Rac123 and RhoA in the cancer group was significantly higher than that in the normal group ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.14

【参考文献】

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本文编号：1470543