GSTP1基因启动子甲基化在肺癌诊断中的意义

发布时间：2018-01-31 01:50

本文关键词： 肺癌肺泡灌洗液 GSTP1基因甲基化早期诊断　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：肺癌是发病率和死亡率较高的恶性肿瘤,预后较差。多数肺癌患者在中晚期或者已经转移不适合手术治疗时才被确诊,5年总体生存率不到15%,提高诊断率是迫切需要解决的问题,也对改善患者预后具有重要的意义。目前肺癌的筛查和诊断主要依赖影像学检查和组织细胞学检查,此外肿瘤分子标志物在肺癌的辅助诊断中也发挥重要作用。随着对肺癌发病机制的研究,DNA异常甲基化逐渐成为研究热点。DNA甲基化是发生在基因启动子和第一外显子区CpG岛调控制基因转录的重要机制,DNA异常甲基化参与多种恶性肿瘤的发生和发展。谷胱甘肽S转移酶P1基因(Glutathione S-transferases P1,GSTP1)是多种致癌物的II相代谢酶基因,在维持细胞代谢分解致癌物、抗氧化损伤和抑制细胞癌变的过程中发挥重要作用。GSTP1基因启动子异常甲基化是否参与到肺癌发病过程中,能否作为有价值的肺癌辅助诊断指标,尚不清楚。由于多数患者不能进行手术或者不能耐受手术,使得组织肿瘤基因检测受到限制。因此本研究首先分析肺癌患者肺癌组织与肺泡灌洗液细胞中GSTP1基因启动子甲基化状态是否一致,来明确能否利用肺泡灌洗液代替肺癌组织检测GSTP1基因启动子甲基化,在此基础上研究肺癌患者和肺部良性疾病患者肺泡灌洗液GSTP1基因启动子甲基化状态及其诊断肺癌的敏感度和特异度,并通过与外周血肺癌相关肿瘤标志物NSE、ProGRP、CAl25和CYFRA21-1诊断肺癌的一致性及敏感度和特异度的对比分析,及GSTP1基因启动子甲基化与肺癌患者临床病理特征的关联性分析,研究GSTP1基因启动子甲基化在肺癌诊断中的价值和意义,为肺癌寻找一种分子辅助诊断指标。方法:1.实验分组:(1)肺泡灌洗液代替肺癌组织检测GSTP1基因启动子甲基化可行性的研究:收集50例肺癌患者的肺泡灌洗液及其肺癌组织标本,分别作为肺泡灌洗液组和肺癌组。(2)GSTP1基因启动子甲基化在肺癌诊断中的价值研究:收集100例肺癌患者和100例肺部良性疾病患者的肺泡灌洗液和外周血标本,分别作为肺癌组和对照组;另收集100例健康人外周血标本,并作为正常组。2.利用PCR联合高分辨率熔解曲线(High resolution melting assay,HRM)(PCR-HRM)方法检测肺癌组织和肺泡灌洗液细胞GSTP1基因启动子甲基化;采用电化学发光免疫分析检测血清肿瘤标志物NSE、ProGRP、CAl25和CYFRA21-1水平。3.数据分析:利用SPSS 17.0软件对结果数据进行统计学分析,GSTP1基因启动子甲基化率用检出率(%)表示。肺泡灌洗液代替肺癌组织用于检测GSTP1基因启动子甲基化可行性的研究采用Mc Nemar检验;各组GSTP1基因甲基化率的比较采用χ2(Chi-square)检验;利用Kappa统计量分析GSTP1基因启动子甲基化与肿瘤标志物诊断肺癌的一致性;肿瘤标志物和GSTP1基因启动子甲基化对肺癌诊断的价值通过绘制受试者操作特性(Receiveroperating characteristics,ROC)曲线进行分析;不同临床病理特征肺癌患者的GSTP1基因甲基化率关联性分析采用χ2检验。检验水准为α=0.05,以P0.05为差异有统计学意义。结果:1.肺泡灌洗液代替肺癌组织检测GSTP1基因启动子甲基化的可行性:肺癌组织组和肺泡灌洗液组GSTP1基因启动子甲基化率分别为48.0%(24/50)和44%(22/50),两组GSTP1基因启动子甲基化率无明显差异(P=0.688)。2.肺癌患者GSTP1基因启动子甲基化状态及其诊断肺癌的敏感度和特异度:肺癌组和对照组GSTP1基因启动子甲基化率分别为57%(57/100)和12%(12/100)。经ROC曲线分析后,发现当以5%甲基化为cut-off值时,GSTP1基因甲基化诊断肺癌的敏感度和特异度最好,敏感度和特异度分别为57%和88.0%,此时肺癌组甲基化率为48.0%(48/100),对照组甲基化率为11.0%(11/100),两组差异有统计学意义(χ2=32.91,P0.001)。3.GSTP1基因启动子甲基化在肺癌诊断中的价值:GSTP1基因启动子甲基化与NSE、ProGRP、CAl25和CYFRA21-1的Kappa值分别为0.733、0.712、0.466和0.485。经ROC曲线分析,肺泡灌洗液GSTP1基因甲基化与NSE、ProGRP、CAl25和CYFRA21-1诊断肺癌的AUC值分别为0.719、0.814、0.839、0.698和0.884,GSTP1基因启动子甲基化诊断肺癌敏感度虽然低于NSE,但特异度与NSE相同,敏感度和特异度均高于CA125。4.GSTP1基因启动子甲基化与肺癌患者临床病理特征关联性:肺癌患者肺泡灌洗液GSTP1基因启动子甲基化率与年龄、性别及病理类型无关,P值分别为0.414、0.628和0.101。早期(Ⅰ和Ⅱ期)肺癌患者GSTP1基因甲基化率为32.7%(18/55),明显低于晚期(Ⅲ和Ⅳ期)的66.7%(30/45),χ2=11.422,P=0.001,但显著高于对照组,χ2=11.014,P=0.001;高分化和中分化肺癌患者甲基化率为37.3%(22/59),明显低于低分化患者的63.4%(26/41),χ2=6.615,P=0.010,但显著高于对照组,χ2=15.591,P0.001。结论:1.肺泡灌洗液可代替肺癌组织用于GSTP1基因启动子甲基化的研究。2.肺癌患者GSTP1基因启动子处于高甲基化状态,诊断肺癌灵敏度和特异度分别57.0%和88.0%,诊断价值较好,并且与肿瘤标志物诊断肺癌一致性较好,可用于肺癌的辅助诊断。3.GSTP1基因启动子甲基化与肺癌病理分期和分化程度有关。
[Abstract]:The methylation status of GSTP1 gene in lung cancer patients and its significance in the diagnosis of lung cancer were studied . The methylation of GSTP1 gene was detected by using SPSS 17.0 software . The methylation rate of GSTP1 gene in lung cancer patients was 48.0 % ( 48 / 100 ) and 11.0 % ( 11 / 100 ) respectively .

【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

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