去势抵抗性前列腺癌伴骨转移自然杀伤细胞治疗的初步临床研究

发布时间：2018-02-03 01:06

本文关键词： 细胞免疫治疗前列腺癌自然杀伤细胞　出处：《苏州大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:研究去势抵抗性前列腺癌伴骨转移(metastatic castration resistant prostate cancer mCRPC)患者自体外周血自然杀伤(natural killer,NK)细胞经体外大规模扩增后的生物学特性,初步评估体内自然杀伤细胞治疗mCRPC的安全性及有效性。方法:(1)选择2013年1月-2014年6月来我院接受治疗的去势抵抗性前列腺癌伴骨转移患者8例,完成患者的术前相关检查:外周血常规、肝肾功能、前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen PSA),淋巴细胞亚群、血清中细胞因子;临床影像学评估(胸片、B超、X-CT、磁共振、骨扫描);采用Kamofsky评分评估患者生活质量;数字疼痛强度量表(Numerical rating scale NRS)对每位患者的疼痛进行疼痛评分。抽取患者外周血,每次50ml,共3-4次。(2)Ficoll密度梯度离心法获得外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells PBMC),NK包被培养瓶为T75培养瓶,接种细胞用;培养到50 ml体积,变黄时由一个T75培养瓶扩增到两个T75培养瓶,变黄时转移到培养袋继续培养。后续补液只需要加GT-T551+1000IU IL-2+10%自体血清。自体血清用完后,加自体血浆,全部用完后可以不加。CD137L(5ug/ml)因子包被培养瓶用;γ干扰素(1000U/ml)d0天加入,1000×,IL-15(2ug/L)补充到GT-T551,IL-1β(1000U/ml)、IL-7(1000U/ml)、IL-12(1000U/ml)、IL-18(1000U/ml)、IL-21(1000U/ml)因子在d1天加入。(3)对体外培养扩增的NK细胞进行显微镜观察细胞生长情况、流式细胞仪检测NK细胞的纯度,采用Calcein-AM分析NK细胞对前列腺癌细胞系PC-3的杀伤能力,体外鉴定NK细胞是否具有治疗前列腺癌的潜能。细胞回输之前经过无菌、内毒素、支原体等质量检验。(4)所有患者均接受自体自然杀伤细胞输注治疗,其中4例患者接受3次输注治疗,剩下4例患者接受4次输注治疗,完成前列腺癌患者NK细胞输注术后相关检查,对前列腺癌患者细胞输注术后的生活质量及疼痛再次进行评分,判断NK细胞对mCRPC治疗的安全性和有效性。结果:(1)从抽取的50ml外周血中分离出NK细胞,进行体外培养扩增,NK细胞可以达到1000倍左右的扩增效率,总细胞数量平均达到4.39×109,CD3-CD16/56+NK细胞的纯度平均达到84.3%。(2)体外扩增的NK细胞对PC-3及K562具有明显的杀伤作用,在效靶比10:1时,对PC-3及K562的杀伤作用分别为78%和82%。(3)NK细胞回输完成后第三天检测,8例患者当中有5例患者出现前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)的下降,2例患者出现PSA的上升,1例患者PSA回输前后均大于可检测上限值(PSA㧐10000 ng/ml)。7例患者外周血出现CD3-CD56+NK细胞的比例升高,6例患者外周血出现CD8+T细胞的比例升高。(4)根据Kamofsky及NRS评分,所有患者的生活质量均得到改善,骨痛均得到不同程度的缓解,所有患者在输注过程中及输注后均未发生不良反应与毒副作用。结论:(1)本次研究中的自体NK细胞经大规模扩增后NK细胞可以达到1000倍左右的扩增效率,总细胞数量平均达到4.39×109,CD3-CD16/56+NK细胞的纯度平均达到84.3%。(2)自体自然杀伤细胞的治疗具有很好的安全性及耐受性,其初步临床治疗效果较好,mCRPC患者运用自然杀伤细胞进行治疗应该具有较好的前景。(3)肿瘤患者输注治疗后,细胞因子IL2,IL12,IFN及TNF未见明显上升,7例患者的CD3-CD16/CD56+NK细胞及6例患者的CD8+T细胞比例上升,在某种程度上可唤醒患者的细胞免疫应答。(4)Gleason评分为9分的患者均未出现PSA的下降,Gleason评分低于9分的患者出现PSA的下降,提示Gleason评分越高的患者NK细胞治疗效果越不佳。
[Abstract]:Objective : To study the biological characteristics of natural killer ( NK ) cells in patients with castration - resistant prostate cancer with metastatic prostate cancer in vitro and to evaluate the safety and efficacy of natural killer cells in vivo . Methods : ( 1 ) To evaluate the safety and efficacy of natural killer cells in patients with metastatic prostate cancer with bone metastases . Methods : ( 1 ) To evaluate the quality of life of patients with prostate specific antigen ( PSA ) , lymphocyte subsets and serum cytokines in our hospital from January 2013 to June 2014 . ( 2 ) Peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) were obtained from peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) by Ficoll density gradient centrifugation . NK cells were cultured in a culture flask of T75 culture flask . ( 2 ) The percentage of CD3 - CD56 + NK cells in peripheral blood of 7 patients was improved and the percentage of CD3 - CD16 / CD56 + NK cells in all patients was higher than that before infusion . ( 4 ) There was no decrease in the percentage of CD3 - CD16 / CD56 + NK cells and 6 cases of patients .

【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25

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