细胞骨架维持胶质瘤干细胞表型功能研究

发布时间：2018-02-04 10:22

  本文关键词： 胶质母细胞瘤 胶质瘤干细胞 侵袭 细胞运动 Notch 信号通路 肌动蛋白细胞骨架 Arp2/3复合体　出处：《天津医科大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:胶质母细胞瘤是最常见的原发性颅内肿瘤。肌动蛋白细胞骨架调节分子—Arp2/3复合体对胶质瘤细胞运动和迁移至关重要,促进肿瘤侵袭。本研究旨在研究肌动蛋白细胞骨架是否参与维持干细胞表型,及其干细胞表型维持过程中的作用。内容:探究胶质瘤干细胞在原发胶质母细胞瘤中的存在和分布形式。研究干细胞标志物在胶质瘤干细胞中的表达水平,评价胶质瘤干细胞的自我更新能力。检测Arp2/3复合体是否参与胶质瘤干细胞表型的维持,以及潜在调控机制。方法:收集14例胶质母细胞瘤患者肿瘤中心区域的组织标本,利用免疫组织化学染色检测干细胞标志物(CD133,Nestin,Notch1和Delta-like1)和细胞分化标志物(GFAP和Tu J1)在肿瘤细胞中的表达水平和分布情况。免疫磁珠分选技术富集CD133+U87-MG和U251-MG胶质瘤干细胞,采用三维胶质瘤细胞球培养获得具有自我更新能力的胶质瘤干细胞。Western blot、免疫荧光染色和单细胞成球实验分别用来检测干细胞标志物在体外CD133+胶质瘤细胞球中的表达及其自我更新能力。综合干细胞标志物表达水平和自我更新能力评价胶质瘤干细胞表型。利用慢病毒载体shRNA敲低Delta-like1(DLL1)和Arp2,以及Arp2/3复合体特异性抑制剂CK636,探究其对胶质瘤干细胞表型维持的作用。同时应用分离亚细胞蛋白的Western blot和免疫荧光染色检测敲低Arp2对DLL1亚细胞定位的影响。建立颅内原位种植稳定表达荧光素酶的CD133+U87-MG胶质瘤细胞的裸鼠模型,验证敲低Arp2对胶质瘤干细胞体内成瘤能力的影响。结果:原发胶质母细胞瘤患者肿瘤标本中,CD133+、Nestin+、Notch1+和DLL1+肿瘤干细胞聚集形成管状结构,GFAP+和TuJ1+肿瘤细胞呈片状聚集于远离上述管状结构的区域,进一步的免疫荧光染色显示Notch1和DLL1共表达于上述肿瘤干细胞,部分位于管状结构内的DLL1+肿瘤细胞同时表达内皮标志物CD31。体外实验中,流式细胞术检测经过免疫磁珠分选后的CD133+U87-MG细胞比例为84.70±2.70%,CD133+U251-MG细胞比例为74.23±2.43%。CD133+细胞在干细胞培养基中形成三维胶质瘤细胞球,Western blot和免疫荧光染色显示CD133+胶质瘤细胞球干性标志物CD133和Nestin,Notch通路组分Notch1、NICD1和DLL1的表达水平显著高于10%血清培养贴壁生长未经筛选的胶质瘤细胞,细胞分化标志物GFAP和TuJ1的表达水平则显著降低。shRNA敲低DLL1显著降低U87-MG和U251-MG胶质瘤细胞球干性标志物CD133和Nestin表达,降低Notch通路活性(NICD1和HES1表达下降),GFAP和TuJ1表达水平显著升高;shDLL1还显著降低了胶质瘤干细胞的单细胞成球能力(p0.05)。shRNA敲低Arp2和抑制剂CK636抑制U87-MG和U251-MG胶质瘤细胞片状伪足形成,同时显著降低CD133、Nestin、NICD1和HES1,升高GFAP和TuJ1的表达水平,shArp2和CK636还还显著降低了胶质瘤干细胞的单细胞成球能力(p0.05)。然而,同时敲低DLL1和Arp2未进一步降低CD133、Nestin、NICD1和HES1,升高GFAP和TuJ1的表达水平,未进一步降低单细胞成球能力,但外源可溶性DLL1却恢复了敲低DLL1和Arp2引起的干细胞表型的缺失。潜在机制是Arp2/3复合体维持DLL1的亚细胞定位,Western blot和免疫荧光染色提示shArp2和CK636降低细胞膜上DLL1的表达,增加了细胞质中DLL1的表达。颅内原位种植模型中,敲低Arp2显著降低CD133+U87-MG胶质瘤细胞的致瘤能力。结论:Notch配体DLL1依赖于细胞骨架调控分子Arp2/3复合体,维持Notch通路活性,进而维持胶质瘤干细胞表型。细胞骨架参与胶质母细胞瘤干细胞表型的调控过程,为靶向肿瘤侵袭迁移的治疗策略提供理论支持和创新思路。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.41

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 周志华;易良;卞修武;;胶质瘤干细胞研究进展[J];中华病理学杂志;2007年03期

2 徐俊杰;于洪泉;国巍;赵伟;金宏;温娜;齐玲;;西兰花多肽对大鼠C6胶质瘤细胞生长的影响[J];中风与神经疾病杂志;2012年11期

3 徐俊杰;于洪泉;赵伟;金宏;温娜;齐玲;刘兴吉;;西兰花多肽对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用[J];吉林大学学报(医学版);2013年01期

4 仝海波,江澄川,唐镇生,金一尊;胶质瘤细胞化学增敏作用实验研究[J];山西临床医药;2000年07期

5 李嗍,王枫,缪珊,骆文静;过量锌对鼠胶质瘤细胞体外生长的影响[J];解放军预防医学杂志;2001年04期

6 梁一鸣,郭国庆,郑少俊,沈伟哉;胶质瘤血管内皮生长因子表达的调节[J];临床与实验病理学杂志;2001年02期

7 曲元明,韩韬,李桂林,王成伟;血管内皮细胞生长因子抗体对胶质瘤生长的影响[J];山东医科大学学报;2001年02期

8 黄强,董军;胶质瘤的分子外科治疗[J];中国微侵袭神经外科杂志;2001年04期

9 叶明,周岱,周幽心,王玮,傅建新,黄煜伦;血管内皮生长因子在胶质瘤中的表达[J];肿瘤;2002年06期

10 顾宇翔,陈衔城,王宇倩;胶质瘤对亲细胞非均质分子脂质和几种药物敏感性的比较[J];复旦学报(医学版);2003年02期

相关会议论文 前10条

1 李飞;李梅;卢佳友;朱刚;林江凯;孟辉;吴南;陈志;冯华;;脂质微区干扰剂甲基-β-环糊精影响C6胶质瘤细胞侵袭和迁移的体外实验研究[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年

2 吴安华;王运杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;胶质瘤的生物治疗-从实验室到临床[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

3 徐宏;韩杨云;孙中书;李新军;;与胶质瘤代谢通路相关的候选基因筛选[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

4 潘冬生;;多基因修饰胶质瘤细胞疫苗的抗肿瘤免疫反应[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年

5 俞文华;车志豪;张祖勇;许培源;陆镛民;傅林;朱强;陈锋;杜权;;骨桥蛋白在胶质瘤细胞中的表达及其信号传导途径[A];2005年浙江省神经外科学术会议论文汇编[C];2005年

6 张震;徐克;;低强度超声诱导C6胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究[A];中华医学会第十三次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2013年

7 蒋伟峰;高方友;尹浩;;白细胞介素-17及其受体在胶质瘤中的表达及临床意义[A];2013年贵州省神经外科年会论文集[C];2013年

8 徐庆生;张小兵;周永庆;;胶质瘤干细胞及其放疗敏感性[A];2011年浙江省神经外科学学术年会论文汇编[C];2011年

9 杨孔宾;赵世光;刘炳学;陈晓丰;戴钦舜;;K~+通道阻断剂四乙胺对大鼠胶质瘤细胞的增殖和凋亡影响[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年

10 黄强;;胶质瘤生成细胞研究[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

相关重要报纸文章 前5条

1 衣晓峰　冯宇曦;中药三氧化二砷有望成为治疗胶质瘤新药[N];中国医药报;2011年

2 记者 匡远深;让胶质瘤干细胞不再“繁殖”[N];健康报;2011年

3 张献怀　张文;瘤区埋雷 持续杀伤[N];健康报;2007年

4 白毅;人脑胶质瘤基础与应用研究喜结“九大硕果”[N];中国医药报;2006年

5 王德江；刘藏；王贵怀；曹勇；王新生；肖新如;交流最新进展 提高诊治水平[N];中国医药报;2005年

相关博士学位论文 前10条

1 张辰;细胞骨架维持胶质瘤干细胞表型功能研究[D];天津医科大学;2017年

2 汪云;抗精神病药喹硫平治疗胶质瘤的实验研究[D];第三军医大学;2015年

3 董军;CUL4B在神经胶质细胞瘤中的作用研究[D];山东大学;2015年

4 张睿;循环miR-221/222在胶质瘤诊断与预后中的价值与基于CED的中枢神经系统给药新方法的研究[D];山东大学;2015年

5 许森林;ALDH1A1在胶质瘤侵袭和结直肠癌转移中的作用和机制[D];第三军医大学;2015年

6 王啸;靶向嵌段共聚物胶束在胶质瘤磁共振成像、药物输送及治疗的应用[D];安徽医科大学;2015年

7 廖红展;锌指转录因子SNAI2在miR-203的影响下通过上皮间质转化参与胶质瘤耐药机制的调节[D];南方医科大学;2015年

8 潘俊;IRG1促进胶质瘤增殖的作用机制及临床意义[D];南方医科大学;2015年

9 郑传宜;胶质瘤中GLUT3基因异常表达的意义及其相关调控机制[D];南方医科大学;2015年

10 徐红超;氩氦冷冻消融联合GM-CSF治疗胶质瘤小鼠的疗效及其对小鼠脾脏树突状细胞免疫功能影响[D];南方医科大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 张大庆;单核细胞趋化蛋白-1在骨髓间充质干细胞向胶质瘤细胞趋化中的作用研究[D];大连医科大学;2012年

2 黄俊龙;ADC值与胶质瘤Ki-67、MGMT的相关性研究[D];福建医科大学;2015年

3 李明聪;下调Pygo2对U251及U251起源的胶质瘤干细胞生物学特性的影响[D];福建医科大学;2015年

4 徐云峰;胶质瘤干细胞的3D培养及其核酸适体筛选的探索[D];福建医科大学;2015年

5 张静文;T细胞过继免疫治疗小鼠脑胶质瘤原位模型的研究[D];河北医科大学;2015年

6 洪宇;胶质瘤瘤周水肿、病理级别、Ki-67表达三者相关性研究[D];石河子大学;2015年

7 姬云翔;磷酸化Cx43蛋白在人胶质瘤细胞中表达及其与肿瘤细胞增殖相关性研究[D];石河子大学;2015年

8 朱峰;OPN的异常表达与胶质瘤的相关性研究[D];河北医科大学;2015年

9 刘兵;SENP1表达水平对人脑胶质瘤发生发展的作用机制及其相关性[D];河北医科大学;2015年

10 李文华;Slit2/Robo1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义[D];河北医科大学;2015年

，

本文编号：1490009