胰腺星状细胞中Hic-5对胰腺癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2018-02-11 14:08

本文关键词： 胰腺星状细胞 Hic-5 胰腺癌细胞生物学行为　出处：《西南医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过研究胰腺星状细胞(pancreatic stellate cell,PSC)和胰腺癌细胞共培养体系中胰腺星状细胞Hic-5基因表达下调对胰腺癌细胞的生长增殖、凋亡、侵袭迁移等生物学行为能力的影响,为Hic-5作为胰腺癌浸润转移的新兴标志物的研究及基因靶向治疗奠定初步的理论和实验基础。方法:1.分别以0 pmol(A组)、6.25 pmol(B组)、12.5 pmol(C组)、25 pmol(D组)和50 pmol(E组)的siRNA沉默胰腺星状细胞的Hic-5基因,转染6小时后RT-PCR检测各实验组中胰腺星状细胞的Hic-5mRNA表达,免疫荧光法检测胰腺星状细胞中Hic-5表达;Western blot检测各实验组胰腺星状细胞中的Hic-5蛋白表达;2.分别以A组、B组、C组、D组和E组胰腺星状细胞与相同的胰腺癌细胞a组、b组、c组、d组、e组行共培养48h;3.共培养结束后,采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭迁移能力变化;采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测各组胰腺癌细胞增殖率变化;采用流式细胞法检测各组胰腺癌细胞凋亡率变化;采用免疫荧光法和Western blot检测各组胰腺星状细胞中MMP-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达变化。结果:1.Hic-5表达在胰腺星状细胞的细胞质中,胰腺星状细胞Hic-5 mRNA和Hic-5蛋白表达量随Hic-5 siRNA转染浓度增大逐渐减少,与A组比较,C组、D组和E组减少明显,差异具有统计学意义(P0.05);各实验组中胰腺星状细胞Hic-5免疫荧光强度随Hic-5 siRNA转染浓度增大逐渐减少,与A组比较,D组和E组减少明显,其差异具有统计学意义(P0.05)。2.随着胰腺星状细胞Hic-5 siRNA转染浓度增大,与之对应的各组胰腺癌细胞相对迁移距离逐渐减小,与a组比较,d组和e组胰腺癌细胞相对迁移距离减小明显,其差异具有统计学意义(P0.05);各组胰腺癌细胞穿膜细胞数逐渐减少,与a组比较,c组、d组和e组胰腺癌细胞穿膜数量减少明显,其差异具有统计学意义(P0.05);各组胰腺癌细胞凋亡率逐渐增大;各组胰腺癌细胞增殖率逐渐减小,与a组比较c组、d组和e组胰腺癌细胞增殖率有显著减小,其差异具有统计学意义(P0.05);各组胰腺星状细胞MMP-9蛋白表达量和荧光强度逐渐减少,与A组比较,C组、D组和E组细胞MMP-9蛋白表达量和免疫荧光强度减少明显,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.Hic-5 siRNA序列在胰腺星状细胞中取得较好的转染效率;2.成功建立Hic-5沉默后的胰腺星状细胞与胰腺癌细胞共培养模型;3.Hic-5的siRNA可有效抑制胰腺星状细胞中Hic-5的表达,同时降低其MMP-9蛋白表达;4.胰腺星状细胞中Hic-5表达的下调可显著降低胰腺癌细胞增殖能力,增加胰腺癌细胞凋亡能力,同时降低胰腺癌细胞的侵袭、迁移能力。
[Abstract]:The expression of Hic - 5 mRNA in pancreatic stellate cells was detected by Western blot . Results : 1 . The expression of Hic - 5 mRNA and Hic - 5 mRNA in pancreatic stellate cells were detected by Western blot . Results : 1 . The expression of Hic - 5 mRNA and Hic - 5 mRNA in pancreatic stellate cells was significantly decreased by Western blot . Results : 1 . The expression of MMP - 9 protein in pancreatic stellate cells was decreased and the expression of MMP - 9 protein in pancreatic stellate cells was decreased .

【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.9

【参考文献】