RNA结合蛋白RNPC1对肾癌细胞生物学功能的影响

发布时间：2018-02-12 21:59

  本文关键词： RNPC 肾癌 生物学功能 抑癌基因　出处：《医学研究生学报》2017年04期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的 RNPC1在人体肿瘤中可能是抑癌基因也可能是促癌基因,其在肾癌细胞中的角色尚不明朗。研究RNPC1对肾癌细胞生物学功能的影响,以探索RNPC1的表达与肾癌发生发展之间的关系。方法将肾癌细胞CAKI-1和CAKI-2分别构建RNPC1基因高表达(RNPC1组)、短发夹RNA干扰RNPC1基因表达(shRNPC1组),另设空白对照组以及阴性对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测RNPC1 mRNA及蛋白在肾癌细胞中的表达情况。运用慢病毒转染技术,建立稳定表达的RNPC1高表达,干扰的肾癌细胞系。检测RNPC1稳转的肾癌细胞系中mRNA及蛋白的表达情况。通过CCK-8细胞增殖实验、克隆实验、划痕实验、迁移侵袭实验,检测RNPC1对肾癌细胞增值,迁移,侵袭能力的影响。运用Western blot检测RNPC1稳转的肾癌细胞系中EMT通路蛋白表达水平的变化,探究RNPC1对肾癌细胞生物学功能影响的分子机制。结果 Western blot和qRT-PCR结果表明,与空白对照组比较,RNPC1组的RNPC1水平明显上调(P0.05),与阴性对照组比较,shRNPC1组的RNPC1水平明显下调(P0.05)。RNPC1组细胞A450值和克隆计数较空白对照组明显降低;shRNPC1组细胞A450值和克隆计数较阴性对照组明显升高(P0.05)。划痕实验结果表明shRNPC1组细胞迁移距离[CAKI-1:(303.98±12.31)μm,CAKI-2:(352.50±24.60)μm]较阴性对照组[CAKI-1:(303.98±12.31)μm,CAKI-2:(237.25±12.89)μm]增大(P0.05);RNPC1组细胞迁移距离[CAKI-1:(132.52±35.13)μm,CAKI-2:(126.50±19.24)μm]较空白对照组[CAKI-1:(281.65±19.71)μm,CAKI-2:(300.00±22.28)μm]减小(P0.05)。细胞的迁移和侵袭实验表明,shRNPC1组迁移和侵袭的细胞数较阴性对照组明显增多(P0.05);迁移和侵袭的细胞数少于空白对照组(P0.05)。结论 RNPC1基因高表达能抑制肾癌细胞CAKI-1和CAKI-2的细胞增殖、迁移及侵袭能力,可以为临床治疗肾癌提供新的作用靶点。
[Abstract]:Objective RNPC1 may be a tumor suppressor gene or a tumor promoter gene in human tumors, and its role in renal cell carcinoma is not clear. To study the effect of RNPC1 on the biological function of renal cell carcinoma, To explore the relationship between the expression of RNPC1 and the occurrence and development of renal cell carcinoma. Methods the high expression of RNPC1 gene was constructed in renal cancer cells CAKI-1 and CAKI-2 respectively. The short hairpin RNA interfered with the expression of RNPC1 gene in shRNPC1 group, and a blank control group and a negative control group were set up. The expression of RNPC1 mRNA and protein in renal cell carcinoma cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot, and lentivirus transfection technique was used to detect the expression of RNPC1 mRNA and protein in RCC cells. The expression of mRNA and protein in the stable RNPC1 transformed renal cell line was detected. The expression of mRNA and protein was detected by CCK-8 cell proliferation assay, clone assay, scratch assay, migration and invasion assay. To detect the effect of RNPC1 on the proliferation, migration and invasion of renal cancer cells, Western blot was used to detect the expression level of EMT pathway protein in the stable RNPC1 cell line. To explore the molecular mechanism of the effect of RNPC1 on the biological function of renal carcinoma cells. Results Western blot and qRT-PCR showed that, Compared with the blank control group, the RNPC1 level of the RNPC1 group increased significantly, and the RNPC1 level of the shRNPC1 group significantly decreased the A450 value and clone count of the shRNPC1 group compared with the blank control group. The cell A450 value and clone count in the shRNPC1 group were significantly lower than those in the blank control group. The cell migration distance of shRNPC1 group [CAKI-1:(303.98 卤12.31 渭 m] was 352.50 卤24.60 渭 m, compared with that of negative control group [CAKI-1:(303.98 卤12.31 渭 m, 237.25 卤12.89 渭 m]. The cell migration distance of RNPC1 group [CAKI-1:(132.52 卤35.13] 渭 m [126.50 卤19.24 渭 m] was lower than that of the blank control group [CAKI-1:(281.65 卤19.71 渭 m CAKI-2U 30.00 卤PC22.28 渭 m]. The cell migration and invasion of RNPC1 group was lower than that of control group [CAKI-1:(281.65 卤19.71 渭 m CAKI-2 + 300.00 卤PC22.28 渭 m]. The cell migration and invasion of RNPC1 group showed that the cell migration distance of RNPC1 group [CAKI-1:(132.52 卤35.13] 渭 m was 126.50 卤19.24 渭 m] less than that of the control group [CAKI-1:(281.65 卤19.71 渭 m]. The number of cells in migration and invasion was significantly higher than that in negative control group, and the number of cells in migration and invasion was less than that in control group. Conclusion the high expression of RNPC1 gene can inhibit the proliferation of CAKI-1 and CAKI-2 cells in renal cancer cells. The ability of migration and invasion can provide a new target for clinical treatment of renal cell carcinoma.
【作者单位】： 南京医科大学第一附属医院药学部;南京医科大学第一附属医院泌尿外科;南京医科大学第一附属医院乳腺外科;
【基金】：国家自然科学基金(81602336,81001329)
【分类号】：R737.11

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