miR-29b2c重组腺病毒的构建及对胃癌细胞增殖和迁移的影响

发布时间：2018-02-13 00:22

  本文关键词： miR- 胃癌 重组腺病毒 基因治疗　出处：《生物工程学报》2017年07期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：构建了miR-29b2c重组腺病毒Ad-miR-29b2c,考察了其对HGC-27、MGC-803胃癌细胞增殖及迁移的抑制作用。采用PCR从基因组扩增miR-29b2c片段,并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdT-29b2c,经酶切及测序鉴定。穿梭质粒经PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态,产生重组腺病毒质粒Ad-miR-29b2c,再经PacⅠ线性化后转染293A细胞进行包装。重组腺病毒扩增后感染HGC-27细胞,通过MTT及细胞迁移实验观察Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞增殖及迁移的影响。采用Western blotting检测Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达的影响。酶切、测序及荧光定量PCR结果表明重组腺病毒构建成功,miR-29b及miR-29c在HGC-27细胞过表达。MTT实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞增殖。细胞迁移实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞迁移。此外,Ad-miR-29b2c能显著降低HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达水平。综上所述,构建了miR-29b2c的重组腺病毒,并发现其可以抑制胃癌细胞HGC-27和MGC-803的增殖及迁移,该作用可能与miR-29抑制HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达有关。
[Abstract]:MiR-29b2c recombinant adenovirus Ad-miR-29b2cwas constructed, and its inhibitory effect on proliferation and migration of HGC-27MGC-803 gastric cancer cells was investigated. MiR-29b2c fragment was amplified by PCR from the genome and cloned into adenovirus shuttle vector pAdTrack-CMV. The shuttle plasmid pAdT-29b2cwas constructed and identified by restriction endonuclease digestion and sequencing. The shuttle plasmid was linearized by Pme 鈪，

本文编号：1506900