肺癌患者免疫状态的综合评估及细胞免疫治疗与化疗联合治疗肺癌的临床疗效分析

发布时间：2018-02-14 19:50

  本文关键词： 肺癌 细胞免疫治疗 肿瘤浸润淋巴细胞 细胞因子 预后　出处：《吉林大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景与目的:肺癌在全世界恶性肿瘤发病率和死亡率中均高居首位。尽管手术、化疗、放疗等传统治疗方法有所改进及分子靶向药物的应用,患者的5年生存率仅有17%,寻找肺癌治疗的新策略成为当今研究的焦点。既往学者们认为肺癌是一种免疫原性较弱的肿瘤。近年来,随着程序性死亡蛋白-1(programmed cell death protein-1,PD-1)、其配体PD-L1及细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)等免疫检查点分子的发现,肺癌免疫治疗取得新的突破,提示免疫治疗将开启肺癌治疗的新时代。研究表明,肺癌患者的免疫状态与其预后密切相关。肺癌细胞存在MHC-I类分子的表达下调、PD-L1的表达上调,继而逃避T细胞的免疫监视,导致肿瘤免疫逃逸的发生。肺癌细胞出现主要组织相容性复合体I相关分子A(major histocompatibility complex class I-related chain A,MICA)及主要组织相容性复合体I相关分子B(major histocompatibility complex class I-related chain B,MICB)的表达上调,MICA、MICB可从肿瘤细胞中脱落,形成血清可溶性MICA(soluble MICA,s MICA)、血清可溶性MICB(soluble MICB,s MICB),抑制免疫细胞功能。此外,肺癌发生时,肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)成分发生改变。另外,肿瘤细胞及免疫细胞可释放一些细胞因子,抑制机体免疫应答。免疫治疗可有效打破机体免疫抑制发挥抗肿瘤作用。研究表明,肺癌患者存在免疫细胞的功能异常,因此应用体外活化扩增淋巴细胞的细胞免疫治疗(cellular immunotherapy,CIT)可能改善患者预后。目前少数研究表明应用CIT可能改善肺癌患者的预后,但CIT具体应用时间、与化疗的联合治疗模式仍需进一步探讨。此外,目前尚缺乏评判CIT对免疫状态影响的相关指标。我们通过以下实验对肺癌患者免疫状态及CIT治疗肺癌的效果进行评价。实验方法:1、收集我院病理学诊断为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的患者的组织标本,通过免疫组化的方法检测肺癌组织中肺癌表面分子MHC-I类分子、PD-L1、MICA/B及肿瘤浸润CD8+淋巴细胞的表达,并分析肺癌表面分子及肿瘤浸润CD8+淋巴细胞与患者临床特征及预后的相关性。2.收集我院初治肺癌患者的血清标本,通过Luminex方法检测血清中细胞因子如IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α等的含量,通过ELISA法检测血清中s MICA、s MICB的含量,分析血清中细胞因子及s MICA、s MICB的含量与患者临床特征及预后的相关性。3.通过流式细胞术,检测顺铂处理A549及H446细胞后,A549及H446细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB)、CD226配体(CD112、CD155)及TRAIL受体(DR4、DR5)等表面分子表达的变化,探讨顺铂增强NK细胞杀伤活性可能的机制。通过钙黄绿素释放法,明确顺铂联合NK细胞对A549及H446细胞是否存在协同杀伤效应。4.回顾性分析我院CIT与化疗联合及单纯化疗的NSCLC患者的临床数据,对两组患者的无进展生存期(progression free survival,PFS)及总体生存期(overall survival,OS)进行评估,明确CIT与化疗联合与单纯化疗相比是否改善NSCLC患者的预后。并通过流式细胞术检测CIT患者CIT前后外周血淋巴细胞比例的变化,通过Luminex法检测CIT治疗前后血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α等的含量变化,寻找评判CIT对免疫状态影响的相关指标。结果:1、肺癌组织存在MHC-I类分子表达下调;COX回归分析显示MHC-I类分子的表达与患者性别、吸烟指数、病理类型、TNM分期及肿瘤分化程度相关,男性患者、吸烟指数≥400、鳞癌患者MHC-I类分子下调明显,且TNM分期越晚、肿瘤分化程度越差,其MHC-I类分子表达下调越明显;MHC-I类分子高表达组的PFS及OS均优于MHC-I低表达组(P0.05)。肺癌组织存在PD-L1表达上调;PD-L1表达水平与患者吸烟指数及病理类型相关,吸烟指数≥400及鳞癌患者其PD-L1表达水平增高;PD-L1低表达组的PFS优于PD-L1高表达组(P0.05),PD-L1低表达组OS较PD-L1高表达组有延长趋势,但差异无显著性(P0.05)。肺癌组织中存在MICA/B的表达上调;MICA/B表达水平与患者临床特征及预后无明显相关性。肺癌基质及癌巢中存在CD8+细胞浸润,且基质中CD8+细胞数高于癌巢中细胞数;基质与癌巢中CD8+细胞数与患者病理类型相关,鳞癌患者基质与癌巢中CD8+细胞高于腺癌中CD8+细胞数;基质中CD8+细胞高表达组的PFS优于低表达组(P0.05),其OS也有延长趋势,但无统计学差异(P0.05);癌巢中CD8+细胞高表达组与低表达组的PFS及OS无明显差异(P0.05)。2、肺癌患者存在TNF-α及IFN-γ水平下调,IL-6水平上调,且差异有显著性(P0.05);肺癌患者IL-2有降低趋势,IL-10有增加趋势,但无统计学差异(P0.05)。COX多因素回归分析,各细胞因子的表达水平与患者临床特征及预后无明显相关性(P0.05)。肺癌患者s MICA水平高于健康志愿者(P0.05),肺癌患者s MICB水平较健康志愿者有升高趋势,但无统计学差异(P0.05)。患者s MICA及s MICB水平与患者临床特征无相关性。s MICA低水平患者的PFS较高水平患者明显延长(P0.05)。而s MICB表达水平与患者预后无相关性(P0.05)。3、顺铂可上调肺癌细胞表面MICA、MICB、CD112、CD155、DR4、DR5的表达,且与顺铂处理时间呈时间依赖性。顺铂联合NK细胞对A549及H446细胞均有协同杀伤作用,且杀伤活性与顺铂预处理时间呈时间依赖性。4、CIT与化疗联合组与单纯化疗组相比PFS与OS明显延长(P0.05)。亚组分析显示I-IIIA期患者,CIT与化疗联合组与单纯化疗组相比PFS无明显差异(P0.05),其OS有延长趋势,但无统计学差异(P0.05)。IIIB-IV期患者CIT与化疗联合治疗组与单纯化疗组相比PFS与OS均明显延长(P0.05)。CIT治疗后患者外周血中CD3+CD8+T细胞明显增加,Treg细胞明显减少,差异有显著性(P0.05),CD3+CD4+、CD3-CD56+、CD3+CD56+细胞无明显差异。CIT治疗前后血清中细胞因子水平无明显变化(P0.05)。结论:1、肺癌细胞存在MHC-I类分子的表达下调、PD-L1及MICA/B分子的表达上调,MHC-I类分子的表达下调及PD-L1的表达上调与患者不良预后相关。MICA/B的表达与患者预后无明显相关性。肺癌基质及癌巢中存在CD8+细胞表达,基质中CD8+细胞数高于癌巢中细胞数。基质中CD8+细胞的表达与预后相关,而癌巢中CD8+细胞的表达与预后无明显相关性。2、肺癌患者TNF-α及IFN-γ水平较健康志愿者明显降低,IL-6水平较健康志愿者明显升高,但各细胞因子表达水平与预后无明显相关性。肺癌患者s MICA水平较健康人表达增高,且s MICA高表达与肺癌预后不良有关。3、顺铂可通过促进肺癌细胞表面MICA、MICB、CD112、CD155、DR4、DR5的表达,与NK细胞产生协同杀伤作用。4、CIT与化疗联合可改善肺癌患者预后。CIT后外周血中CD3+CD8+细胞增加,Treg细胞减少,CD3+CD8+及Treg细胞可作为判断CIT对免疫状态影响的指标。本研究中我们发现肺癌患者免疫状态与预后有相关性,细胞免疫治疗与化疗联合可改善肺癌患者预后。本研究结果将为CIT与化疗联合在临床患者中的应用提供理论依据。化疗与CIT联合可能将成为肺癌患者的新治疗模式。
[Abstract]:In recent years , with programmed cell death protein - 1 ( PD - 1 ) , its ligand PD - L1 and cytotoxic T - lymphocyte - associated antigen - 4 ( MICA ) , the expression of MHC - I molecule was down - regulated . TIL)鎴愬垎鍙戠敓鏀瑰彉.鍙﹀��,鑲跨槫缁嗚優鍙婂厤鐤�缁嗚優鍙�閲婃斁涓，

本文编号：1511474