基于纳米金探针和蛋白芯片高灵敏检测肺癌多肿瘤标志物的研究

发布时间：2016-10-24 11:26

  本文关键词：基于纳米金探针和蛋白芯片高灵敏检测肺癌多肿瘤标志物的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《郑州大学》 2013年

基于纳米金探针和蛋白芯片高灵敏检测肺癌多肿瘤标志物的研究

王文涛  

【摘要】：肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率已跃居常见肿瘤之首,严重危害人类的身体健康。随着医学科学技术的不断发展,肺癌的诊断和治疗水平已得到显著提高,但仍远远不能满足临床和人类的需要。大量研究表明,肺癌的预后与临床分期密切相关,早期肺癌患者的5年生存率可达70%以上,降低肺癌病死率最有效的方法是对其及早诊断和治疗。但肺癌早期多不易发现,大部分肺癌在确诊时已经是中晚期。所以,及早发现、诊断和治疗肺癌有着很大的临床意义。目前在临床上,肺癌早期检查主要依靠影像学,但假阳性率较高,且检查费用贵。因此,对肺部结节的良恶性鉴别是早期肺癌检测中亟待解决的问题。随着蛋白质组学的不断发展,肿瘤标志物检测在肺癌早期诊断及治疗中的价值越来越受到重视。 多项研究表明,在肿瘤早期检测和诊断、临床分期、病理分型、疗效评估、监测及预后判断等方面,肿瘤标志物具有重要的意义。良好的肿瘤标志物应该具有高敏感性、强特异性、检测方便等特点。目前对肺癌来说,还没有高敏感性、强特异性的标志物,单一肿瘤标志物往往检测意义较小,难于全面评估。现在临床上多将多种肿瘤标志物联合进行检测,但多指标联合检测操作比较繁琐,并且灵敏度不够高,不能够满足大面积筛查实现肺癌的早期检测。由于生物芯片技术和纳米技术的日益发展,快速的高灵敏度的多肿瘤标志物联合检测得以实现。 目的： 建立以蛋白芯片和纳米金探针为基础的高灵敏度多肿瘤标志物检测体系,进而实现对肺癌早期诊断。 方法： 1.首先对纳米金进行标记和表征,然后进行纳米金探针的制备和蛋白芯片的制作,从而建立基本的检测体系。 2.通过梯度优化实验对纳米金的最佳蛋白稳定量和纳米金探针添加量进行优化选择,再进行染色方法的筛选和优化,并对待测肿瘤标志物进行特异性分析,最后对温度、时间等实验条件方面进行优化,从而优化检测体系。 3.利用本检测体系检测86例肺癌病人和42例健康体检者,对其检测结果进行分析,绘制四种肿瘤标志物的标准曲线,并与临床所用的电化学分析法及DKK1试剂盒检测结果进行比较,分析检测结果和临床资料参数间的关系。 4.统计学处理：应用SPSS17.0进行统计学分析,采用非参数检验、X2检验及相关性分析。取检验水准a=0.05。 结果： 1.最佳蛋白稳定量在200μL纳米金溶液中CEA为2.0μL(抗体浓度为5mg／mL)CYFRA21-1为5.0μL(抗体浓度为2mg／mL),NSE为14.0μL(抗体浓度为1.04mg／mL),DKK1为6.0μL(抗体浓度为2mg／mL)。 2.纳米金在标记检测抗体后发生了红移,最大吸收峰由520nm增大到530nm。 3.纳米金探针的最佳加入浓度为CEA1.0nM,CYFRA21-1为1.4nM,NSE为1.8nM,DKK1为2.0nM。 4.本研究最终选定H202法纳米金沉积进行染色,并确定氯金酸的最佳浓度为20mM,H202的最佳浓度为3.0M。 5.四种肿瘤标志物在蛋白芯片上无交叉反应和相互干扰,特异性良好。 6.四种肿瘤标志物的标准曲线：在绘制的四种蛋白标准曲线中均有线性关系比较良好的阶段,具体线性分布为CEA(40pg/mL～25ng/mL, R2=0.99)、 CYFRA21-1(70pg/mL-25ng/L,R2=0.994).NSE(90pg/mL～25ng/mL,R2=0.994)、 DKK1(90pg/mL～25ng／mL,R2=0.996)。检测限方法确定了CEA蛋白的灵敏度为10pg/mL,CYFRA21-1为15pg/mL,NSE的灵敏度为20pg/mL,DKK1为30pg/mL。 7.检测结果与临床所用的电化学发光法检及DKK1试剂盒测结果进行相关性分析,显示两种方法检测结果整体一致(相关系数分别为CEA:r=0.986；CYFRA21-1:r=0.985；NSE:r=0.978；DKK1:r=0.993)。四种肿瘤标志物值在肺癌组和健康体检组间的差异具有统计学意义(均P0.05),且在肺癌组中的浓度明显高于健康体检组。在健康对照组中,四种肿瘤标志物浓度在不同性别组和不同年龄组(≤60岁和60岁)间差别没有统计学意义(均P0.05)。在肺癌组,四种肿瘤标志物的值在不同年龄、性别、是否吸烟间差别没有统计学意义(均P0.05)。CEA、CYFRA21-1、NSE在不同病理分型中差别有统计学意义(均P0.05),而DKK1在不同病理分型中差别无统计学意义(P=0.294)。并且,CEA在腺癌中的浓度最高(P0.001),CYFRA21-1在鳞癌中的浓度最高(P=0.004),NSE在小细胞癌中的浓度最高(P=0.002)。四种肿瘤标志物在不同临床分期中差别有统计学意义(均P0.05),并且Ⅳ期的浓度明显高于其他3个分期(均P0.05)。取42例健康体检者四种肿瘤标志物值的95%为各指标的临界值(4.82ng/mL toCEA,3.04ng/mL to CYFRA211,23.7ng／mL to NSE,14.15ng／mL to DKK1),月市癌组敏感性CEA为38.37%,CYFRA21-1为51.16%,NSE为26.74%,DKK1为52.33%,四者联合检测为88.37%,比任何单一检测都大大提高(均P0.001)。并且,CEA在腺癌中的敏感性最高为54.35%,CYFRA21-1在鳞癌中的敏感性最高为54.84%,NSE在小细胞肺癌中的敏感性最高为66.67%。 结论： 本研究以蛋白芯片和纳米金探针为基础,通过纳米金沉积进行信号放大,构建了一种超微量蛋白质的检测方法,能够半定量的对蛋白进行可视化检测,已能够高灵敏对CEA、CYFRA21-1、NSE和DKK1四种肿瘤标志物在1.5h内进行检测,实现多种肿瘤标志物同时快速检测,达到肺癌早期诊断和评估的目标。并且,由于通过肉眼或普通的显微镜即可对实验结果进行分析,使用仪器非常简单,大大降低了检测成本,具有广泛的应用前景。同时,为临床肿瘤标志物检测和肺癌早期诊断提供了理论和试验基础。

【关键词】：
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R734.2
【目录】：

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1 朱珉;于军;周文利;付向宁;;生物芯片技术在肺癌研究中的应用价值[J];中国肺癌杂志;2011年05期

2 陈名声 ,于文彬 ,卢宝弼 ,代艳丽 ,刘建新;血清组织多肽特异抗原水平与肺癌生物学行为的关系[J];中华结核和呼吸杂志;2002年05期

【共引文献】

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1 黄芳,王香玲,荫斌霞,展淑琴;支气管肺泡灌洗液中3种肿瘤标志物的含量检测及意义[J];第四军医大学学报;2005年16期

2 章华础;萧祥熊;;组织多肽特异性抗原检测及其临床应用(文献综述)[J];放射免疫学杂志;2007年04期

3 刘艺;;血清细胞角蛋白检测在肺癌临床诊断中的价值(文献综述)[J];放射免疫学杂志;2007年04期

4 毛晓敏;徐尚敖;赵中强;;NSCLC患者血清TPS、CYFRA21-1、NSE和CEA的水平及联检的临床价值[J];放射免疫学杂志;2011年04期

5 赖萃;曾光明;黄丹莲;冯冲凌;胡霜;苏峰峰;赵美花;黄超;危臻;;基于免疫胶体金标记技术的检测研究及其在堆肥中的应用展望[J];分析化学;2010年06期

6 黄述斌;孟刚;杨苗苗;王岳君;;TfR1/CD71在甲状腺乳头状癌中表达的意义[J];安徽医药;2012年08期

7 郑以军;;分子生物学在医学检验中的应用(文献综述)[J];放射免疫学杂志;2012年05期

8 王有良;朱一剑;丁显平;;L1、E6和E7基因序列分析[J];成都医学院学报;2013年03期

9 江金群;张玉心;徐成岭;胡建国;马杰;石莹;;Hes1基因启动子的克隆及活性研究[J];蚌埠医学院学报;2013年09期

10 汪付兵;周虎;舒清博;涂建成;;胸腔积液中CK19-2G2、CK18-3A9和间皮素检测的临床意义[J];国际检验医学杂志;2013年21期

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1 祁光宇;智晓莹;任维维;黄银军;牟克斌;刘学荣;王宇;蒋韬;;检测O型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）论文集[C];2010年

2 智晓莹;祁光宇;任维维;刘学荣;牟克斌;黄银君;蒋韬;;Asia 1型口蹄疫病毒免疫胶体金快速检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）论文集[C];2010年

3 Zhi-Mei Huang;Wang Li;Sheng Li;Fei Gao;Qi-Ming Zhou;Fang-Ming Wu;Ni He;Chang-Chuan Pan;Jian-Chuan Xia;Pei-Hong Wu;Ming Zhao;;Cytokine-induced Killer Cells in Combination With Transcatheter Arterial Chemoembolization and Radiofrequency Ablation for Hepatocellular Carcinoma Patients[A];第九届中国肿瘤微创治疗学术大会论文集[C];2013年

4 Hong Shen;;Establishment of Serum Protein Pattern for the Prediction of a Therapeutic Effect of First-line Pemetrexed/cisplatin Chemotherapy in Patients with Lung Adenocarcinoma[A];2013年第六届国家级分子靶点药物治疗新进展学习班暨浙江省肿瘤化疗学术年会论文集[C];2013年

5 Hong Shen;;Proteomic biomarker predicts therapeutical effects of oxaliplatin combining with fluoropyrimidine in metastatic gastric cancer patients by the SELDI-proteinchip platform[A];2013年第六届国家级分子靶点药物治疗新进展学习班暨浙江省肿瘤化疗学术年会论文集[C];2013年

6 张卫霞;罗俊;张学愈;潘年松;盛勇;陈哲洪;涂明旌;;莪术油干预宫颈癌荷瘤裸鼠组织中Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达观察[A];贵州省中西医结合学会诊断专业第四次学术会议论文集[C];2013年

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1 乔光明;靶向纳米生物复合物在癌细胞成像诊断分析、药物输送以及治疗中的研究与应用[D];山东师范大学;2011年

2 魏涛;五种血清肿瘤标志物在肺癌中的临床应用研究[D];第一军医大学;2005年

3 沈婵娟;鸭瘟病毒UL51基因部分特性及其基因工程蛋白应用的研究[D];四川农业大学;2010年

4 曹邦荣;癌旁组织中EMT相关基因表达模式及其对肺癌、乳腺癌、肝癌预后的意义[D];北京协和医学院;2013年

5 徐慧敏;非小细胞肺癌放射性肺损伤的临床特征、治疗转归及生物学相关因素分析[D];北京协和医学院;2013年

6 田鹤;组合式离子化RRLC-MS/MS方法与~1H NMR技术的肺癌血浆代谢组学分析方法研究[D];北京协和医学院;2013年

7 陶冉;肝硬化及其并发症、肝细胞癌的多模态MRI研究[D];第三军医大学;2013年

8 师锐赞;靛玉红衍生物PHII-7诱导乳腺癌耐药株MCF-7/ADR凋亡并通过转录因子AP-1逆转其多药耐药[D];北京协和医学院;2010年

9 王俊锋;冷冻消融联合GM-CSF治疗结直肠癌肝转移的试验研究[D];天津医科大学;2013年

10 王冬滨;应用蛋白质组学技术寻找非小细胞肺癌血清早期诊断标志物的实验研究[D];天津医科大学;2013年

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1 于润红;DFO、DFO联合AS_2O_3对HL-60细胞移植瘤裸鼠的治疗作用及对NF-κBp65表达影响[D];郑州大学;2010年

2 高源;用于检测肿瘤标记物并结合光动力学疗法实现靶向治疗的荧光探针[D];山东师范大学;2011年

3 胡寅;基于磁性纳米粒子的典型农兽药残留免疫分析技术[D];上海交通大学;2011年

4 吴瑜佳;胶体金速测卡研制及柑橘溃疡病菌快速诊断[D];重庆大学;2011年

5 孟凡亮;联合检测血清TPS，CEA，，CYFRA21-1，NSE在肺癌诊断中的临床价值[D];安徽医科大学;2011年

6 葛晖;血清基质金属蛋白酶-2和组织多肽抗原与肺癌转移和复发的研究[D];河北医科大学;2004年

7 孔庆龙;肺癌患者手术前后血浆TPS水平变化的初步研究[D];江西医学院;2004年

8 姚舒洋;LUNX mRNA、CK19 mRNA、CEA mRNA在非小细胞肺癌患者淋巴结及外周血微转移中的比较研究[D];山东大学;2005年

9 陈维;四种血清肿瘤标志物在非霍奇金淋巴瘤的临床应用研究[D];第一军医大学;2006年

10 熊国江;血浆TPS在肺部肿瘤诊断及外科治疗中的研究[D];南昌大学;2007年

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1 王金桃,闫建文,赵淑芳,韩晓立,张乃珍,高尔生;不同肿瘤标志物联合检测对PHC诊断的优化模式研究[J];现代预防医学;2002年03期

2 高静;良性疾病肿瘤标志物水平增高的临床探讨[J];放射免疫学杂志;2004年04期

3 倪宁,吕爱玲;4种肿瘤标志物联合检测对胸腔积液鉴别诊断的意义[J];中国医科大学学报;2005年01期

4 刘茶珍;朱佩云;施民新;刘继斌;王文静;;表达蛋白质组学技术及其在食管癌研究中的进展[J];环境与职业医学;2006年02期

5 严枫;胡效亚;;免疫传感器在肿瘤标志物检测中的应用[J];分析测试学报;2006年02期

6 张红蕾;高春芳;胡文华;;食管癌肿瘤标志物研究进展[J];中国肿瘤临床与康复;2007年04期

7 何涛;陶春;林乃龙;刘铁军;;胃癌血清肿瘤标志物的检测及其意义的研究[J];内蒙古民族大学学报(自然科学版);2008年02期

8 刘翠;李偶连;李想;童艳丽;陈缵光;;微流控芯片在肿瘤标志物检测中的应用[J];现代医学仪器与应用;2008年02期

9 易智勇;;胸水多项肿瘤标志物联合检测的临床价值[J];现代临床医学;2009年05期

10 张子相;;血清肿瘤标志物联合检测对诊断肺癌的临床价值[J];医药论坛杂志;2010年11期

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1 倪然;吴逸明;;人工神经网络技术与肿瘤标志联合检测在肺癌预警中的应用[A];中国环境诱变剂学会致癌专业委员会09年学术会议论文汇编[C];2009年

2 王文丽;曹阳;成树贞;;多肿瘤标志物蛋白芯片检测对卵巢癌的诊断价值[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年

3 杨光;唐锁勤;王建文;刘英;刘立真;冯晨;;肿瘤标志物联合检测在神经母细胞瘤诊治中的应用[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年

4 李琦;宋朝君;陈丽华;田莹;陶海强;李永明;金伯泉;;几种肿瘤标志物检测试剂盒的建立及初步应用[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

5 林德贵;金艺鹏;吴晓静;;肿瘤标志物的化学发光免疫分析与临床监测的意义[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(上册)[C];2010年

6 黄建宏;林心;欧兴义;梁小兵;;多肿瘤标志物蛋白芯片技术在肺癌诊断中的应用[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年

7 程广源;;肺癌标志物的临床意义及良恶性胸水的鉴定诊断[A];安徽省抗癌协会第四次代表大会暨乳腺癌、肺癌专业委员会成立会议、安徽省肿瘤防治进展学术研讨会论文汇编[C];2001年

8 刘平;;常用肿瘤标志物的临床意义及评价[A];第三届“分子核医学在肿瘤诊断与治疗中的应用与研究进展”全国肿瘤分子标志的研究与方法学进展学术交流会资料汇编[C];2006年

9 王耀勇;;新的肿瘤标志物与肺癌诊断[A];2006年浙江省内科学学术年会、2006年浙江省老年医学学术年会论文汇编[C];2006年

10 侯淑玲;张琦;张巧花;王军;贺建霞;郭素堂;;弥漫大B细胞淋巴瘤患者11100～11900Da蛋白质谱与肿瘤标志物表达的初步研究[A];第一届全国难治性淋巴瘤学术研讨会暨第二届全国多发性骨髓瘤学术研讨会（国家级血液系统恶性肿瘤继续医学教育学习班）继续教育集[C];2007年

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1 中南大学湘雅二医院老年外科 刘佳;[N];家庭医生报;2008年

2 刘森;[N];医药养生保健报;2009年

3 天津市肿瘤医院检验科 陈瑛　任丽 整理 李运红 赵迎;[N];健康报;2010年

4 赵明;[N];医药养生保健报;2009年

5 华中科技大学同济医学院附属梨园医院 王昌萍;[N];湖北科技报;2004年

6 中南大学湘雅二医院博士 文宇;[N];家庭医生报;2004年

7 齐军;[N];科技日报;2002年

8 胡德荣;[N];中国医药报;2010年

9 王昌萍;[N];健康报;2003年

10 记者 吴长锋;[N];科技日报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李欢;多种肿瘤标志物联合诊断新技术的研究[D];复旦大学;2011年

2 赵玲娣;晚期非小细胞肺癌患者中一线三代新药联合铂双药方案的疗效分析及肿瘤标志物在一线化疗疗效中的预测作用[D];北京协和医学院;2011年

3 王纪文;肺癌相关血清肿瘤标志物的临床应用研究[D];北京协和医学院;2011年

4 姚洪文;新的卵巢上皮性癌蛋白标志物的初步研究[D];中国协和医科大学;2009年

5 方芳;GPC3在肝癌中的临床应用研究[D];第二军医大学;2005年

6 李朴;血清YB-1蛋白定量检测方法的建立及其作为肿瘤标志物的探讨[D];重庆医科大学;2012年

7 吴广平;胸水肿瘤标记物检测及LCT痰检在肺癌诊断中的意义[D];中国医科大学;2005年

8 唐点平;纳米微粒固载蛋白质肿瘤标志物电化学免疫传感器研究及其应用[D];西南大学;2008年

9 黄晓辉;血清MUC1、MUC2及MUC5AC水平检测在胃肠道肿瘤诊断中的临床应用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年

10 周儒;老年胃癌患者手术治疗风险与疗效评价及巨噬细胞相关集落刺激因子作为新型肿瘤标志物的探索[D];复旦大学;2012年

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1 赵桂梅;胃癌及肝癌病人外周血人斯钙素-1mRNA表达的初步研究[D];郑州大学;2005年

2 徐晓卿;胃肠道肿瘤标志物与中医辨证分型的相关性研究[D];山东中医药大学;2006年

3 陈莉;多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床中的应用[D];中南大学;2006年

4 刘兴君;上消化道恶性肿瘤患者血清多项肿瘤标志物联合检测的临床意义[D];山西医科大学;2009年

5 李福明;肿瘤标志物在晚期NSCLC诊治中的临床意义和价值[D];浙江大学;2007年

6 税莉莉;肺癌患者血清胸苷磷酸化酶检测及其临床意义[D];重庆医科大学;2008年

7 李会欣;结直肠癌相关蛋白和基因的临床应用和研究[D];河北医科大学;2009年

8 成淑莲;介入治疗对肺癌患者NSE、VEGF、CYFRA21-1、SCC、CEA的影响[D];青岛大学;2008年

9 张自森;食管鳞癌血清SELDI蛋白质组表达谱的研究[D];郑州大学;2005年

10 金安琴;经内镜胆管刷检、活检及CEA、CA242对胆管癌的诊断价值[D];兰州大学;2006年

  本文关键词：基于纳米金探针和蛋白芯片高灵敏检测肺癌多肿瘤标志物的研究，由笔耕文化传播整理发布。

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