血液肿瘤血清外泌体促进肿瘤细胞耐药与迁移的研究

发布时间：2024-06-16 08:05

　　目的1.将血液肿瘤患者血清外泌体作用肝癌Hep G2细胞、宫颈癌He La细胞,探讨血液肿瘤患者血清外泌体在第二肿瘤细胞耐药及迁移过程中扮演的角色。方法1.血液肿瘤患者及健康人血清外泌体分离提取。2.透射电子显微镜(TEM)对外泌体形态观察。3.蛋白免疫印迹法(Western blot)测定外泌体相应标记蛋白CD63、HSP70及TSG101的表达。4.蛋白免疫印迹法(Western blot)测定外泌体P-gp、MMP-2蛋白表达,并动态监测血液肿瘤患者治疗疗程中血清外泌体P-gp、MMP-2表达情况。5.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血液肿瘤患者血清外泌体作用肝癌Hep G2细胞后P-gp蛋白变化情况;免疫荧光法测定血液肿瘤患者血清外泌体作用宫颈癌He La细胞后P-gp蛋白变化情况。6.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血液肿瘤患者血清外泌体作用肝癌Hep G2细胞后MMP-2蛋白变化情况。7.Transwell细胞迁移实验检测血液肿瘤患者血清外泌体对肝癌Hep G2细胞和宫颈癌He La细胞迁移的影响。结果1.外泌体提取试剂盒所提取的物质呈现明显的脂...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
一 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 第二肿瘤
        1.1.2 血液系统肿瘤与第二肿瘤
        1.1.3 外泌体
        1.1.4 人血清外泌体
        1.1.5 肿瘤耐药
        1.1.6 外泌体与恶性肿瘤化疗耐药
        1.1.7 细胞迁移与肿瘤转移
        1.1.8 外泌体与恶性肿瘤迁移及影响免疫反应
        1.1.9 P-糖蛋白
        1.1.10 MMP-2蛋白
    1.2 研究目的
    1.3 研究内容
    1.4 研究思路
二 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验细胞株
        2.1.2 实验用人血清
        2.1.3 主要仪器及设备
        2.1.4 主要试剂及药品
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 试剂盒提取人血清外泌体
            分离纯化血清外泌体
        2.2.3 外泌体的形态学检测
        2.2.4 实验分组
        2.2.5 蛋白免疫印迹法(Western blot)
            2.2.5.1 人血清外泌体总蛋白提取
            2.2.5.2 细胞总蛋白提取
        2.2.6 细胞免疫荧光
        2.2.7 细胞迁移实验
        2.2.8 统计学处理
三 实验结果
    3.1 人血清外泌体的分离鉴定及P-GP、MMP-2 蛋白检测
        3.1.1 人血清外泌体的形态学及粒径鉴定
        3.1.2 人血清外泌体的标记蛋白检测
        3.1.3 人血清外泌体的P-gp、MMP-2 蛋白检测
        3.1.4 血液肿瘤患者化疗前后血清外泌体P-gp、MMP-2 蛋白的检测
    3.2 血液肿瘤患者血清外泌体增加HEPG2 细胞、HELA细胞中P-GP蛋白的含量,致细胞获得外源性耐药
        3.2.1 血液肿瘤患者血清的外泌体增加Hep G2 细胞P-gp蛋白的含量
        3.2.2 血液肿瘤患者血清的外泌体增加He La细胞P-gp蛋白的含量
    3.3 血液肿瘤患者血清外泌体无明显增加HEPAG2 细胞中MMP-2 蛋白的含量,但致HEPG2 细胞、HELA细胞迁移能力增强
        3.3.1 血液肿瘤患者血清外泌体无明显增加Hep G2 细胞中MMP-2 蛋白的含量
        3.3.2 血液肿瘤患者血清外泌体致HEPG2 细胞、HELA细胞迁移能力增强
四 讨论
    4.1 血液肿瘤患者血清的外泌体会致HEPG2细胞、HELA细胞外源获得性耐药性
    4.2 血液肿瘤患者血清的外泌体会致HEPG2 细胞、HELA细胞迁移能力增强
五 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
附录一 英文缩略词表
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3995121