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叶酸在甲基硝基亚硝基胍致哈萨克族食管上皮永生化细胞DNA损伤中的作用

发布时间:2018-02-21 20:24

  本文关键词: 哈萨克族 食管上皮细胞 叶酸 MNNG 彗星实验 出处:《新疆医科大学》2016年硕士论文 论文类型:学位论文


【摘要】:目的:探讨叶酸在N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致哈萨克族正常食管上皮细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用,以及对DNA损伤等相关指标的作用,为哈族食管癌的防治提供理论依据。方法:采用3因素3水平析因设计将体外培养的哈族正常食管上皮细胞暴露于不同叶酸浓度(0.000、0.400、0.800 ug/m L)和MNNG(0.000、0.750、1.500ug/mL)的培养液中作用48h、72h和96h后,(1)采用噻唑蓝(MTT)法检测叶酸及MNNG对哈萨克族食管上皮增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;(2)采用彗星实验检测DNA损伤水平;采用RT-PCR法检测APE1、MGMT基因m RNA的表达水平;(3)采用Western Blot法检测APE1、MGMT基因蛋白表达水平。结果:随着叶酸浓度降低和MNNG浓度增加:(1)哈族正常食管上皮细胞形态发生了明显的变化,死细胞数目逐渐增多,细胞核出现不同程度的破裂,胞质不匀和细胞完整性损伤,细胞对MNNG损害的敏感性明显增加,96 h时尤为严重;(2)哈族正常食管上皮细胞的抑制率升高,差异有统计学意义,(P0.01);(3)哈族正常食管上皮细胞G0+G1期、S期和G2+M期细胞比例不同,差异有统计学意义(P0.01),细胞周期阻滞在S期和G2+M期;(4)哈族正常食管上皮细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P0.01);(5)各组DNA损伤指标发生了变化,即Tail DNA含量上升,彗星尾长增加,Olive尾矩增加,差异有统计学意义(P0.01);(6)APE1基因的mRNA及蛋白表达水平随着损伤的增加而增加,差异有统计学意义(P0.01);(7)MGMT基因的mRNA及蛋白表达水平则随损伤的增加而下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论:叶酸浓度降低对MNNG致哈族食管正常上皮细胞损伤有一定的促进作用,而保持充足的叶酸则对MNNG的损害起到一定的保护作用。
[Abstract]:Objective: to investigate the effects of folic acid on proliferation, cell cycle and apoptosis of Kazakh normal esophageal epithelial cells induced by N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), and to investigate the effects of folic acid on DNA damage. Methods: normal esophageal epithelial cells of Kazakh nationality were exposed to different folic acid concentrations of 0.400 ~ 0.800 ugmL and MNNG-0.0000.501.500ugmL for 48h and 72h, respectively, by using 3 factors and 3 levels of factorial design for the prevention and treatment of esophageal carcinoma in Kazakh nationality. Methods: in vitro, the normal esophageal epithelial cells of Kazakh nationality were exposed to different concentrations of folic acid 0.400g / mL and 0.7500.501.500ugmL for 48h and 72h, respectively. After 96 hours, the effects of folic acid and MNNG on the proliferation of esophageal epithelium in Kazak nationality were detected by using thiazolyl methylate (MTT) method. Cell cycle and apoptosis were detected by flow cytometry. Comet assay was used to detect the level of DNA damage. RT-PCR method was used to detect the expression level of m RNA of APE1MGMT gene. Western Blot method was used to detect the protein expression level of APE1MGMT gene. Results: with the decrease of folic acid concentration and the increase of MNNG concentration, the morphology of normal esophageal epithelial cells changed significantly. The number of dead cells increased gradually, the nucleus ruptured to varying degrees, the cytoplasm unevenness and cell integrity were damaged, and the sensitivity of cells to MNNG damage was significantly increased at 96 h.) the inhibition rate of normal esophageal epithelial cells in Kazakh nationality was increased. The proportion of normal esophageal epithelial cells in G _ 0 G _ 1 phase and G _ 2 M phase was different, the difference was significant (P 0.01), cell cycle arrest was in S phase and G _ 2 M phase, the apoptosis rate of normal esophageal epithelial cells was increased. There were significant changes in DNA damage index in each group, that is, the content of Tail DNA increased, the tail length of comet increased and the Olive tail moment increased, and the expression level of mRNA and protein increased with the increase of damage. The expression level of mRNA and protein of MGMT gene decreased with the increase of injury, and the difference was statistically significant. Conclusion: the decrease of folic acid concentration can promote the injury of normal esophageal epithelial cells induced by MNNG. And maintaining sufficient folic acid can protect MNNG damage to some extent.
【学位授予单位】:新疆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R735.1

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本文编号:1522793

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