miR-497在肝癌血管生成与转移中的作用和机制研究

发布时间：2018-02-23 03:02

  本文关键词： 肝细胞癌 miR-497 血管生成 癌症转移 VEGFA AEG-1　出处：《华中科技大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的原发性肝癌(主要是肝细胞癌)是全球第二大致死性癌症,发病率呈逐年上升趋势,全球每年有750,000例新发病例。目前手术切除是针对早期肝癌最行之有效的治疗手段。但因肝癌起病隐匿,大部分患者发现时已届晚期,丧失手术治疗时机。传统化疗药物如阿霉素、顺铂等,虽有强劲抗癌效果,但因副作用大、肿瘤靶向性差等原因从而限制了其在肝癌治疗中的应用价值。肝癌患者结局如此凄凉的主要原因还在于我们对其发病的分子机制仍知之甚少,无法实施靶向治疗。因此,探索肝癌发生发展过程中的分子事件,阐明其具体机制并开发有效治疗方式是一项十分紧迫的课题。HCC是血管富集的实体瘤,活跃的血管生成能力和频发的转移是肝癌发生和进展过程中的两大特征,因此抑制肝癌的血管生成和转移的发生有望阻断肝癌的进展,成为肝癌治疗的突破口。MicroRNAs (miRNAs)是一组保守的非编码小RNA,在转录后水平调控基因的表达。研究发现miRNA表达水平的改变参与多种肿瘤发生的重要生物学过程。我们前期应用表达谱芯片筛选了肝癌细胞细胞株与原代正常肝细胞差异性表达的miRNA,其中miR-497在肝癌细胞株中的表达低于原代正常肝细胞。本研究拟进一步验证miR-497的差异性表达并系统研究其在肝癌血管生成和转移过程中的功能及作用靶点。 方法运用SYBR Green qRT-PCR方法鉴定36对肝癌和癌旁组织中miR-497的表达情况,并比较8株肝癌细胞株和2株正常肝细胞株中miR-497的表达差异。通过血管内皮细胞募集实验、小管生成实验、transwell迁移侵袭实验从细胞水平探索miR-497的异常表达在肝癌血管生成和转移中的作用。利用生物信息学预测网站如miRBase、miRNA.ORG、 PicTar、TargetScan等数据库,预测miR-497的靶基因,从中筛选与血管生成及转移相关的靶基因。继而采用SYBR Green qRT-PCR、Western Blot、ELISA以及Luciferase精确靶点验证实验,验证miR-497对预测靶基因的作用靶点,阐明其作用机制。最后,我们利用肝癌裸鼠皮下移植瘤模型和尾静脉注射肝癌细胞构建转移瘤模型的方法,验证miR-497在裸鼠体内对肝癌生长、血管生成和转移的作用。 结果miR-497在肝癌组织中的表达水平明显低于癌旁正常组织,与此一致,miR-497在肝癌细胞株中的表达也普遍低于正常肝细胞株。上调肝癌细胞中miR-497的表达可抑制肝癌细胞对血管内皮细胞HUVEC的募集能力和促小管形成能力,并能抑制肝癌细胞自身的迁移侵袭能力。miR-497可直接作用于血管内皮因子VEGFA和星形胶质细胞上调基因AE6-1的3’-UTR序列从而发挥抑制肝癌血管生成和转移的能力。慢病毒介导的miR-497可明显降低肝癌细胞的裸鼠皮下成瘤能力、瘤内血管生成能力和血液中肝癌细胞的转移能力。 结论我们的研究阐明了miR-497通过直接抑制靶基因VEGFA和AEG-1从而抑制肝癌的血管生成和转移能力,揭示了miR-497在肝癌发生中的部分作用和分子机制,为miR-497及其靶基因作为肝癌治疗的新的分子靶点奠定了理论基础。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

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本文编号：1525968