前体蛋白酶对非小细胞肺癌cGMP依赖性蛋白激酶选择性剪切作用的研究
本文关键词： PC-5 furin PC-7 PKG-1 非小细胞肺癌 前体蛋白酶 cGMP PKG 出处：《华中科技大学》2015年博士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：第一部分前体蛋白酶与PKG-1在肺癌组织中的表达以及临床意义研究 目的：探讨PC家族蛋白和PKG-1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。 方法：免疫组织化学法检测178例非小细胞肺癌患者,肿瘤组织标本以及癌旁组织标本中PC家族蛋白以及PKG-1蛋白表达水平；医学统计学分析,各因子表达水平与患者性别、年龄、病理类型、淋巴结转移、临床分期、远处转移等临床参数的相互关系。 结果： 1. PC-5、furin、PC-7和PKG-1在非小细胞肺癌组织中及癌旁组织中的表达： PC-7、furin在非小细胞肺癌组织中阳性表达率分别为：44.4%以及51.7%,均显著高于非小细胞肺癌癌旁组织(P0.05)；PC-5在非小细胞肺癌中的表达(19.1%)低于癌旁组织(20.6%)(P0.05);PKG-1在非小细胞肺癌及癌旁组织中阳性表达率分别为6.2%和57.8%(P0.05)。 2. PC-5、furin、PC-7和PKG-1与非小细胞肺癌临床病理参数的关系： PC-7、furin表达均与非小细胞肺癌分期、组织分化及淋巴结转移正相关(P0.05),与性别、年龄无关(P0.05)；PC-5在鳞癌表达率(22.2%)显著低于腺癌表达率(75.6%)；与淋巴结转移、临床分期负相关(P0.05),与性别、年龄无关(P0.05)。PKG-1与各非小细胞肺癌临床病理参数均无关(P0.05)。 结论：PC-7、furin可能在非小细胞肺癌的发生与发展中起促进作用,PKG-1与非小细胞肺癌的发展无关。 第二部分非小细胞肺癌前体蛋白酶对PKG-1蛋白剪切的研究 目的：通过前体蛋白酶的过表达以及抑制其活性,检测cGMP依赖性蛋白激酶的剪切水平,探讨cGMP依赖性蛋白激酶选择性剪切的分子机制。 方法：构建cGMP依赖性蛋白激酶表达质粒pCDNA3-PKG-1,通过hexa-D-arginine、dec-RVKR-cmk以及al-PDX抑制前体蛋白酶活性；过表达前体蛋白酶表达的质粒；免疫印迹法检测在抑制以及过表达前体蛋白酶的条件下,cGMP依赖性蛋白激酶蛋白分子的剪切水平变化；构建不同位点,点突变的cGMP依赖性蛋白激酶分子异构体,检测前体蛋白酶对cGMP依赖性蛋白激酶剪切的蛋白靶点。通过免疫荧光法检测抑制前体蛋白酶活性后,对cGMP依赖性蛋白激酶核转位的抑制作用。 结果：Western-bloting显示细胞内过表达前体蛋白酶家族成员furin, PC7能够促进细胞内cGMP依赖性蛋白激酶蛋白分子剪切,而通过dec-RVKR-cmk以及al-PDX能够抑制细胞内cGMP依赖性蛋白激酶剪切；通过不同的PKG异构体作用。可以发现前体蛋白酶对cGMP依赖性蛋白激酶的剪切位点在161位氨基酸处。抑制前体蛋白酶活性能够抑制cGMP依赖性蛋白激酶从胞浆中转位进入细胞核内。 结论：前体蛋白酶能够剪切cGMP依赖性蛋白激酶分子,其剪切位点为161位氨基酸分子,前体蛋白酶对cGMP依赖性蛋白激酶分子的剪切作用是其进行核转位的必要过程。
[Abstract]:The expression and clinical significance of precursor protease and PKG-1 in lung cancer. Objective: to investigate the expression of PC family protein and PKG-1 protein in non-small cell lung cancer (NSCLC) and their relationship with clinicopathological features. Methods: immunohistochemical method was used to detect the expression of PC family protein and PKG-1 protein in 178 patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). Age, pathological type, lymph node metastasis, clinical stage, distant metastasis and other clinical parameters. Results:. 1. The expression of PC-5 furinine PC-7 and PKG-1 in non-small cell lung cancer (NSCLC) and paracancerous tissues:. The positive expression rates of PC-7furin in non-small cell lung cancer (NSCLC) tissues were 44.4% and 51.7%, respectively, which were significantly higher than those in non-small cell lung cancer (NSCLC) tissues adjacent to NSCLC (P 0.05) and in NSCLC tissues (P < 19.1T).) the expression of PC-7furin in non-small cell lung cancer (NSCLC) tissues was significantly lower than that in NSCLC tissues (P0.05PKG-1) and in non-small cell lung cancer (NSCLC) and paracancerous tissues. The positive expression rates were 6.2% and 57.8% respectively. 2. The relationship between PC-5 furinine PC-7, PKG-1 and clinicopathological parameters of non-small cell lung cancer (NSCLC):. The expression of PC-7 furin was significantly lower than that of adenocarcinoma (P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05, P 0.05@@. There was no correlation between P0.05, PKG-1 and clinicopathological parameters of NSCLC. Conclusion the PKG-1 may play a promoting role in the development and development of non-small cell lung cancer (NSCLC), and there is no correlation between PKG-1 and the development of NSCLC. The second part of the study on the Shear of PKG-1 protein by the precursor Protease of Non-small Cell Lung Cancer. Aim: to detect the shear level of cGMP dependent protein kinase (cGMP) by overexpression and inhibition of its activity, and to explore the molecular mechanism of selective shearing of cGMP dependent protein kinase (cGMP). Methods: cGMP dependent protein kinase expression plasmid pCDNA3-PKG-1 was constructed to inhibit the activity of precursor protease by hexa-D-arginine dec-RVKR-cmk and al-PDX. Western blotting was used to detect the changes of shear level of cGMP dependent protein kinase molecules under the condition of inhibition and overexpression of proproteinases, and to construct the isoforms of cGMP dependent protein kinases at different sites. The protein targets of precursor protease on cGMP dependent protein kinase were detected, and the inhibitory effect of precursor protease on cGMP dependent protein kinase nuclear translocation was detected by immunofluorescence assay. Results the results showed that furin, a member of the protease family, was overexpressed in the cell. PC7 could promote the cleavage of cGMP dependent protein kinase protein, while dec-RVKR-cmk and al-PDX could inhibit the cGMP dependent protein kinase shearing. It was found that the shear site of precursor protease to cGMP-dependent protein kinase was at the amino acid at position 161 by different PKG isomers. Inhibition of precursor protease activity could inhibit the translocation of cGMP-dependent protein kinase from cytoplasm to nucleus. Conclusion: the precursor protease can shear cGMP dependent protein kinase molecule, and its shear site is 161 amino acid molecule. The shear effect of precursor protease on cGMP dependent protein kinase molecule is necessary for its nuclear translocation.
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
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，本文编号：1525698
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