乳铁蛋白抗菌肽抗胃癌及作用机制的研究

发布时间：2018-02-28 02:00

本文关键词： Lfcin B 胃癌细胞细胞凋亡基因表达荷瘤鼠　出处：《安徽医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的探究乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)体外对人胃癌细胞系MGC803细胞增殖和细胞凋亡、细胞周期,以及体内对移植瘤生长的影响,探讨其相关分子机制,为研发治疗胃癌的新手段和新方法提供基础。方法从体外、体内实验两个方面来探讨LfcinB对胃癌的作用及其机制。在体外实验,用LfcinB作用于胃癌细胞系MGC803,检测其对细胞增殖、凋亡和周期的影响,同时检测其对相关基因表达的影响。具体程序如下,1.CCK-8法测定10~(-6)~10_(-2) mg/ml不同浓度梯度的LfcinB对胃癌细胞株MGC803作用24、48和72 h后细胞增殖的影响。2.流式细胞术检测LfcinB处理胃癌细胞系MGC803后其细胞周期与细胞凋亡的变化。3.RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3的m RNA变化情况。4.Western blot检测MGC803细胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白变化。体内实验构建荷人胃癌裸鼠(BALB/cAnN-nu/nu)动物模型,实验程序如下,1.将MGC803细胞接种到裸鼠皮下进行造模,并分为4组:生理盐水组,乳铁蛋白抗菌肽高剂量组,乳铁蛋白抗菌肽低剂量组,顺铂对照组。根据分组将不同剂量的LfcinB腹腔注射裸鼠腹部,观察移植瘤生长情况。2.将剥离的移植瘤组织用来做免疫组化实验,观察凋亡相关蛋白指标变化情况。3.用适量瘤组织做TUNEL实验,检测不同浓度组的凋亡情况。4.用Western blot实验检测组织中不同蛋白变化情况。结果体外实验,1.不同浓度LfcinB对胃癌细胞株MGC803的增殖均具有抑制作用,但在作用24 h时,抑制效果不明显,48 h以后有抑制效果,最高抑制率可达到(30.62±0.72)%,72 h的抑制率为(42.06±0.72)%,并且与阴性对照组比较,差异具有显著性(P0.05,P0.01)。2.LfcinB能促进胃癌细胞株MGC803细胞凋亡,作用24 h时已能促进细胞凋亡,但效果不明显,其中24 h以早期凋亡为主,48 h后开始出现晚期凋亡,72 h总凋亡率最高可达到(25.78±1.74)%,DDP组则主要作用细胞早期凋亡。并且具有时间和剂量依赖性(P0.05,P0.01)。3.细胞周期结果显示,与阴性对照组比较,G0/G1期细胞数量略下降,S期细胞逐渐增多,说明LfcinB在10~(-6)~10_(-2) mg/ml浓度范围内均能影响胃癌细胞的周期,这可能作用于S/G2期,使细胞阻滞在S期产生影响,并且随作用延长呈时间浓度依赖性,但整体来看作用趋势不明显。4.Lfcin B能显著抑制胃癌细胞株MGC803bcl-2基因的mRNA表达,同时促进bax和caspase-3基因的mRNA表达,并且随着LfcinB浓度的增高相关基因下降或上升越明显(P0.05,P0.01)。5.Western blot结果也显示,LfcinB能抑制Bcl-2蛋白表达,促进Caspase-3和Bax蛋白表达,其变化规律与mRNA相同(P0.05,P0.01)。体内实验,1.根据瘤重、瘤体积变化结果可知,不同剂量的LfcinB均能抑制移植瘤的生长,但高剂量LfcinB虽是低剂量浓度一倍,但抑瘤作用不是等比增长,而是近似相同。2.免疫组化实验说明,组织中Bax、Caspase-3的蛋白在阴性对照组中几乎不表达,在高、低剂量组中表达相对较高,而Bcl-2在对照组中表达比较多,在低剂量组中呈散在分布,在高剂量组中几乎不表达。3.TUNEL实验表明,高剂量LfcinB组中细胞凋亡明显,低剂量凋亡程度较低,凋亡指数(AI)分别为(1.84±0.39)%,(8.46±1.01)%,(11.63±1.92)%,(16.54±2.81)%。4.Western-blot实验结果趋势与免疫组化一致,Bax、Caspase-3蛋白表达量随剂量升高而升高,Bcl-2蛋白表达随剂量升高而降低,与阴性对照组比较,差异具有显著性意义(P0.05,P0.01)。结论1.LfcinB能显著抑制MGC803胃癌细胞株的生长、诱导细胞凋亡,作用MGC803细胞周期的S/G2期,使其阻滞在S期。2.LfcinB显著抑制移植瘤的生长,并能体内介导移植瘤细胞凋亡。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of LfcinB ( LfcinB ) on proliferation and apoptosis of gastric cancer cell line MGC803 . The effect of LfcinB on proliferation , apoptosis and apoptosis of gastric cancer cell line MGC803 was investigated by Western blot . The results showed that LfcinB could inhibit the expression of bax and caspase - 3 genes and promote the expression of bax and caspase - 3 genes . The results of Western blot showed that LfcinB could inhibit the expression of Bcl - 2 protein and promote the expression of Caspase - 3 and Bax protein . The expression of Bax and Caspase - 3 in high - dose LfcinB group was significantly higher than that in the control group . Conclusion 1 . LfcinB can significantly inhibit the growth of MGC803 gastric cancer cell line , induce apoptosis , inhibit the S / G2 phase of MGC803 cell cycle , arrest it in S phase . 2 . LfcinB significantly inhibits the growth of transplanted tumor and can mediate the apoptosis of transplanted tumor cells in vivo .

【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.2

【参考文献】