硫酸软骨素对抗黑色素瘤细胞的免疫调控作用
本文关键词: 硫酸软骨素 糖胺聚糖 黑色素瘤 免疫调节 抗肿瘤 lncRNA 出处:《鲁东大学》2017年硕士论文 论文类型:学位论文
【摘要】:背景:硫酸软骨素(chondroitin su Lfate,CS)是一类广泛存在于人与动物结缔(软骨)组织中的糖胺聚糖,它主要是从动物喉骨、鼻中隔、气管等软骨组织分离纯化而得的一类酸性黏多糖,CS的结构是由D-葡糖醛酸与N-2酰-D氨基半乳糖酸硫酸酯组成。硫酸软骨素多作为保健品或药品用于人们的日常生活中,用于防治冠心病、心绞痛、心肌梗死、关节炎、角膜炎、耳聋耳鸣、神经痛等疾病,长期服用毒副作用较低,随着近几年的深入研究,发现硫酸软骨素还具有抗肿瘤的作用,具有多种重要生物活性。黑色素瘤是人类常见的一种疾病,它是发生率、死亡率增长速度最快的皮肤病癌症,一直以来都受到人们的广泛关注。化疗法对人体的伤害程度非常大,最根本的方法还是找到相关的基因从而达到治疗黑色素瘤的目的。已有研究证明海参中提取的糖胺聚糖具有抑制黑色素瘤增长的作用,它能够有效控制肿瘤的生长,从而达到治疗黑色素瘤的目的,硫酸软骨素作为糖胺聚糖的一种,本课题拟研究硫酸软骨素提高机体的免疫力作用机制以及控制黑色素瘤生长的作用机制。方法:1、体外培养小鼠脾脏细胞:通过硫酸软骨素进行刺激,从脾脏细胞数目,伽马干扰素水平来检测其免疫水平的变化。2、建立小鼠黑色素瘤模型:通过静脉注射硫酸软骨素,来观察小鼠脾脏细胞、肺浸润性淋巴细胞数目的变化,通过流式细胞术来检测小鼠脾脏细胞、肺浸润性淋巴细胞数目的变化。3、通过提取RNA进行测序:从基因的水平上鉴定硫酸软骨素对小鼠免疫力的影响以及对黑色素瘤模型小鼠的影响。结果:1、通过用硫酸软骨素对正常小鼠个体进行刺激,发现脾脏大小明显增大,在一定的浓度范围内脾脏细胞的数目随着浓度的增高而增加,血液中淋巴细胞百分率升高,这说明了硫酸软骨素具有一定的免疫增强作用。2、建立黑色素瘤模型小鼠,选取合适的硫酸软骨素浓度对黑色素瘤模型小鼠进行刺激,发现血液中淋巴细胞百分率的变化肿瘤组降低,肿瘤加药组升高且与空白对照组相近。通过细胞计数发现小鼠脾脏细胞、肺浸润性淋巴细胞数目均增长,肺部肿瘤个数减少,流式细胞仪分析小鼠脾脏细胞、肺浸润性淋巴细胞中CD8T细胞、CD4T细胞、NKT细胞均有不同程度的变化。3、通过高通量测序,对肿瘤组和肿瘤加药组小鼠脾脏细胞RNA进行测序,分析肿瘤组和肿瘤加药组处理组,发现二组中lnc RNA、m RNA关于细胞周期调控、细胞增殖、免疫调控方面的基因表达量存在差异,并且差异显著,这就为从根本上治愈黑色素瘤提供一定的理论依据。结论:硫酸软骨素能提高机体的免疫力,并且对黑色素瘤的治疗提供了理论依据,能够降低黑色素瘤的个数,从而为黑色素瘤的治疗、治愈提供可能。
[Abstract]:Background: chondroitin sulfate (chondroitin su) is a class of glycosaminoglycans (glycosaminoglycans) that are widely found in human and animal connective tissues (cartilage), mainly from the animal laryngeal bone and nasal septum. The structure of a class of acidic mucopolysaccharide CS, isolated from cartilage tissue such as trachea, is composed of D-glucuronic acid and N-2-acyl-D-galactosulfate. Chondroitin sulfate is used as a health product or medicine in people's daily life. For prevention and treatment of coronary heart disease, angina pectoris, myocardial infarction, arthritis, keratitis, deafness and tinnitus, neuralgia and other diseases, long-term use of toxic side effects are low, with the in-depth study in recent years, found that chondroitin sulfate also has anti-tumor effect. Melanoma is a common disease in humans. It is a skin disease with the fastest rate of morbidity and mortality. People have been paying close attention to it all the time. Chemotherapy is very harmful to the human body. The most fundamental method is to find the relevant genes to treat melanoma. Studies have shown that the glycosaminoglycan extracted from sea cucumber can inhibit the growth of melanoma, and it can effectively control the growth of melanoma. In order to treat melanoma, chondroitin sulfate is a kind of glycosaminoglycan. The aim of this study was to study the mechanism of chondroitin sulfate (chondroitin sulfate) enhancing immunity and controlling the growth of melanoma. Methods: the spleen cells of mice were cultured in vitro by chondroitin sulfate, and the number of spleen cells was determined by chondroitin sulfate. Gamma interferon level to detect its immune level changes. 2, to establish a mouse melanoma model: through intravenous injection of chondroitin sulfate to observe the number of spleen cells, lung infiltrating lymphocytes, Flow cytometry was used to detect mouse spleen cells. Changes in the number of infiltrating lymphocytes in the lung. 3. Sequencing by extracting RNA: the effects of chondroitin sulfate on the immunity of mice and on melanoma model mice were evaluated at the gene level. Results: 1, by using sulfuric acid. Chondroitin stimulated normal mice, It was found that the size of spleen increased obviously, and the number of spleen cells increased with the increase of concentration, and the percentage of lymphocytes in blood increased in a certain concentration range. This indicated that chondroitin sulfate had a certain immune enhancement effect. 2. The melanoma model mice were established and the appropriate concentration of chondroitin sulfate was selected to stimulate the melanoma model mice. It was found that the percentage of lymphocytes in the blood decreased in the tumor group, but increased in the tumor plus drug group and similar to that in the blank control group. The number of splenocytes and infiltrating lymphocytes in the lung increased and the number of tumor in the lung decreased in the tumor group by cell count. Flow cytometry was used to analyze the spleen cells of mice and the changes of CD4T cells in CD8T cells in infiltrating lymphocytes of lung. The RNA of spleen cells in tumor group and tumor plus drug group were sequenced by high-throughput sequencing. It was found that there were significant differences in the gene expression of lnc RNAm RNA in cell cycle regulation, cell proliferation and immune regulation between the two groups. Conclusion: chondroitin sulfate can improve the immunity of the body and provide a theoretical basis for the treatment of melanoma, which can reduce the number of melanoma. Thus provides the possibility for the treatment and cure of melanoma.
【学位授予单位】:鲁东大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R739.5
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,本文编号:1553004
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