Prdx4对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移影响的研究

发布时间：2018-03-02 11:04

  本文关键词： A549 Prdx4 细胞增殖 凋亡 迁移　出处：《南方医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：肺癌是临床常见的恶性肿瘤,并且是癌症相关死亡的主要原因。大约85%的肺癌属于非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其主要的病理类型是腺癌和鳞癌。尽管目前对肺癌的早期发现和联合治疗已取得很大进步,但患者的整体生存率并没有显著的提高。因此,探索治疗肺癌的新方法至关重要。与其他组织器官相比,肺暴露于更高浓度的氧环境中,因此它是研究自由基作用的独特器官。肺脏通过一个广泛、复杂而有效的抗氧化防御系统,使其免于自由基和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的损害。越来越多的研究表明,过氧化物还原酶4(peroxiredoxin4,Prdx4)与肿瘤的发生和发展密切相关。如Prdx4在前列腺癌组织中高表达并影响前列腺癌细胞的增殖,抑制Prdx4的表达可有效促进胶质母细胞瘤细胞的凋亡并抑制肿瘤的生长。此外,Prdx4作为一个新型分泌型介质参与了肿瘤诱发的破骨细胞生成。在肺癌中,Prdx4在癌组织的表达水平明显高于未癌变组织,这一现象在肺腺癌中尤为明显。有研究证实,过表达Prdx4能够增强肺腺癌细胞的侵袭能力,并能促进肿瘤的转移。为了深入了解Prdx4在肺腺癌细胞中过表达的意义,本研究对Prdx4在调节人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移过程中可能的作用进行了探索。为此,我们展开了以下实验:首先,采用脂质体瞬时转染法将重组质粒pcDNA3.0-HA-Prdx4或针对人Prdx4基因的小干扰RNA(Prdx4 small interference RNA,Prdx4-siRNA)分别转入到人肺腺癌A549细胞中,利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法(western blot,WB)分别检测Prdx4 mRNA和蛋白质的表达水平。结果显示,pcDNA3.0-HA-Prdx4质粒转染组A549细胞的Prdx4 mRNA和蛋白质的表达水平明显上调(P值均0.05),而Prdx4-siRNA干扰组A549细胞的Prdx4mRNA和蛋白质的表达水平明显下调(P值均0.01)。随后,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测过表达或沉默Prdx4表达后A549细胞的增殖活性。CCK-8检测结果显示,Prdx4过表达的A549细胞在24、48和72h时的D450nm值均明显高于pcDNA3.0-HA阴性对照组(P值均0.05),并且以96h时的D450nm值2.241±0.068和1.596±0.103,差异更加明显(P0.01);沉默Prdx4表达后A549细胞在48、72和96h时的D 450nm值明显低于阴性对照siRNA(negative control siRNA,NC-siRNA)组(P值均0.01)。接着,采用免疫荧光技术检测过表达或沉默Prdx4表达后A549细胞的凋亡情况。免疫荧光检测结果显示,Prdx4过表达的A549细胞在顺铂(20μmol/L)刺激24和48h后,凋亡细胞数与pcDNA3.0-HA阴性对照组相比明显减少,差异均具有明显的统计学意义(P0.05和P0.01);沉默Prdx4表达后A549细胞在顺铂(20μmol/L)刺激24和48h后,凋亡细胞数均明显多于NC-siRNA组(P0.05和P0.01)。最后,一方面,采用划痕实验检测过表达或沉默Prdx4表达后A549细胞的横向迁移能力。划痕实验结果显示,Prdx4过表达A549细胞的愈合率明显高于pcDNA3.0-HA阴性对照组(P0.01);沉默Prdx4表达后A549细胞的愈合率明显低于NC-siRNA组(P0.01)。另一方面,采用Transwell迁移实验检测过表达或沉默Prdx4表达后A549细胞的纵向迁移能力。Transwell迁移实验结果显示,Prdx4过表达A549细胞穿过小室膜的细胞数明显高于pcDNA3.0-HA阴性对照组(P0.01);沉默Prdx4表达后A549细胞穿过小室膜的细胞数明显低于NC-siRNA组(P0.01)。通过上述研究,可以得出以下的结论:1、重组质粒pcDNA3.0-HA-Prdx4或针对人Prdx4基因的siRNA成功转染人肺腺癌A549细胞。2、过表达Prdx4促进A549细胞的增殖,沉默Prdx4表达抑制A549细胞的增殖。3、过表达Prdx4抑制A549细胞的凋亡,沉默Prdx4表达促进A549细胞的凋亡。4、过表达Prdx4增强A549细胞的迁移能力,沉默Prdx4表达减弱A549细胞的迁移能力。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2
，

本文编号：1556248