美洲大蠊多肽对MFC荷瘤小鼠免疫的影响

发布时间：2018-03-03 13:26

  本文选题：美洲大蠊精制物CⅡ-3　切入点：人工合成短肽HFDT1　出处：《大理大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的肿瘤是影响人类健康的重大疾病,目前寻找高效低毒的治疗药物是科技工作者的主要任务之一。美洲大蠊精制物CⅡ-3是大理大学云南省昆虫生物医药研发重点实验室最新研制出的一种以肽类为主的物质,已经发现对多种人类肿瘤细胞有抑制作用,但这种肽类物质的体内抗肿瘤作用及其机制并不清楚。本课题建立了小鼠胃癌细胞MFC荷瘤BALB/c小鼠模型,给予美洲大蠊精制物CⅡ-3及相关合成短肽HFDT1处理,研究其对荷瘤小鼠肿瘤抑制作用及其免疫功能的影响,了解美洲大蠊多肽抗肿瘤的免疫调节机制,为研发该药提供理论基础。方法选取6~8周龄体重在20g左右的SPF级BALB/c小鼠,将对数生长的MFC细胞接种于小鼠右侧腋下。将荷瘤小鼠随机分为模型组(生理盐水20mL/kg灌胃,1次/d)、CTX组(45mg/kg,10m L/kg隔日腹腔注射1次)、CⅡ-3高剂量组(400mg/kg,20mL/kg灌胃,1次/d)、CⅡ-3低剂量组(200mg/kg,20m L/kg灌胃,1次/d)、短肽HFDT1组(7.8mg/kg,10m L/kg腹腔注射,1次/d),另设正常对照组(生理盐水20m L/kg灌胃,1次/d)。小鼠肿瘤模型建立次日开始给药,连续给药10d。处理结束的次日,处死小鼠,分离肿瘤块、脾脏和胸腺,计算抑瘤率、脾指数及胸腺指数。经小鼠眼内眦静脉取血,进行外周血免疫细胞分析,收集血清,ELISA法测血清IgG、IgM、IgA水平。取小鼠腹腔细胞,纯化巨噬细胞后加LPS培养24h,取培养上清测细胞因子TNF-α。用小鼠淋巴细胞分离液分离肿瘤块淋巴细胞进行Th1/Th2反应测定。制备脾单个细胞悬液,荧光素标记的抗体染色后FACS Calibur检测固有免疫细胞及淋巴细胞含量,进行淋巴细胞亚群及Th1/Th2反应分析。分离脾淋巴细胞,加入ConA培养48h后收集上清,ELISA检测细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、L-17、IFN-γ和TNF-α。CFSE标记脾淋巴细胞后分别加入LPS和ConA培养4d通过FACS Calibur进行B细胞和T细胞增殖功能测定。结果1.美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低剂量组及HFDT1组在荷瘤小鼠体内均表现出抑制肿瘤生长的作用,抑瘤率分别为33.11%、42.88%和46.20%,CⅡ-3低剂量组抑瘤率高于CⅡ-3高剂量组,HFDT1抑瘤率高于CⅡ-3低剂量组。随着给药时间的增加,CTX组小鼠体重下降明显,而美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低剂量组及短肽HFDT1组小鼠体重与正常组及模型组相比无明显变化。2.与CTX组相比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1增加了脾指数及胸腺指数(P0.05),且增加了外周血中的白细胞总数、单核细胞、淋巴细胞及粒细胞的数量(P0.05),免疫球蛋白IgA、IgM和Ig G的含量也呈升高趋势(P0.05)。3.与CTX组相比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1能够上调脾脏中NK细胞、巨噬细胞及DC细胞(P0.05),下调Th17细胞。与正常组相比,CⅡ-3高、低剂量组及HFDT1组巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α升高(P0.05),Th17细胞分泌的IL-17是降低(P0.05),进一步说明小鼠脾脏中巨噬细胞活性升高而Th17细胞降低,这些变化与流式细胞术检测结果相符。此外,CⅡ-3高剂量组及HFDT1组提高了腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的水平(P0.05)。4.与CTX比较,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低剂量、HFDT1能够上调脾淋巴细胞(P0.05)。与模型组比较,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低剂量、HFDT1能增加脾T细胞比例(P0.05)。与CTX组比较,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低剂量、HFDT1能上调CTL(P0.05),下调Treg细胞(P0.05);CⅡ-3低剂量组及HFDT1组能下调初始T细胞(P0.05)。与CTX组比较,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低剂量、HFDT1能上调成熟B细胞(P0.05)。5.与模型组相比,美洲大蠊精制物CⅡ-3高、低剂量组及HFDT1组能刺激T细胞增殖,其中对CTL的刺激作用更为明显(P0.05),而对B细胞的刺激增殖作用不明显(P0.05)。CⅡ-3低剂量组的B细胞及T细胞增殖的刺激能力均高于CⅡ-3高剂量组。6.CⅡ-3及HFDT1对Th的刺激分化作用在不同来源的Th细胞有不同表现。FACS检测结果发现低剂量CⅡ-3刺激脾Th细胞向Th1分化作用强于CⅡ-3高剂量组;高剂量CⅡ-3及HFDT1刺激肿瘤组织Th细胞向Th1分化作用强于低剂量CⅡ-3组。在脾脏中CⅡ-3低剂量组Th1细胞分泌的IFN-γ和IL-2高于CⅡ-3高剂量组,而在肿瘤组织中,CⅡ-3低剂量组Th1细胞分泌的IFN-γ略低于CⅡ-3高剂量组,该结果重复了FACS检测结果。结论1.美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1在小鼠体内具有较好的抗肿瘤作用,且无明显的毒副作用。2.美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1的抗肿瘤作用可能是通过上调外周血免疫细胞的数量,上调免疫器官内细胞的增殖,调节各亚群淋巴细胞的比例,促进CTL的增殖,上调脾脏中巨噬细胞、NK细胞、DC细胞、CTL细胞及Th1细胞反应,上调免疫球蛋白的产生,下调Treg细胞来实现的。3.美洲大蠊精制物CⅡ-3及人工合成短肽HFDT1有望成为一种高效低毒的抗肿瘤候选药物。
[Abstract]:The purpose of tumor is a major disease affecting human health, the drugs to find efficient and low toxicity is one of the main tasks of science and technology workers. Periplaneta americana extracts C II -3 is a peptide based material of Dali University of insects in Yunnan Province Key Laboratory of biomedical research newly developed, has been found to have inhibitory effects on a variety of human tumor cells, but the peptide in vivo antitumor effect and its mechanism is not clear. This study established a mouse gastric cancer cell MFC BALB/c tumor mouse model, given the Periplaneta americana extracts C II -3 and synthetic peptide HFDT1, to study the effect of inhibition and immune function of tumor bearing mice. Understanding the immune Periplaneta americana antineoplastic polypeptide regulatory mechanism, providing a theoretical basis for the development of the drug. Methods SPF BALB/c mice at about 20g 6~8 weeks of weight. 鏁扮敓闀跨殑MFC缁嗚優鎺ョ�嶄簬灏忛紶鍙充晶鑵嬩福�

本文编号：1561216